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我国蛋鸭、肉鸭和鹅的饲养量均居世界之首。其中蛋鸭存栏量占亚洲的80%、世界的66%。这标志着我国需要更多地种鸭,选育优质高产的种鸭势在必行,而传统育种手段费力费时,分子辅助育种研究的开展为育种提供了新的思路。如果我们能找到一些与鸭繁殖性能相关的多态性位点,则能为我国种鸭分子辅助育种提供理论基础。催乳素受体(PRLR)作为催乳素(PRL)的特异性受体,可调节PRL的一系列生理学功能,PRLR基因位于鸡Z染色体上,与其繁殖性能有重要关系,可作为畜禽繁殖性能的一个候选基因。有研究表明雌激素受体(ESR)也可作为繁殖性能的候选基因。但是到目前为止,鸭催乳素受体基因和雌激素受体基因的序列还没有报道。本试验以北京鸭为材料克隆PRLR cDNA和ESR cDNA序列,分析其序列特征;使用半定量RT-PCR检测了PRLR mRNA和ESR mRNA在北京鸭各组织中的表达情况。为北京鸭的分子育种提供理论基础。通过本文的研究,获得以下进展:1.利用RT-PCR技术扩增获得了北京鸭催乳素受体(dPRLR) cDNA长为2499bp的全编码区(GenBank登录号EF205054),该序列包含ATG起始密码子和TAA终止密码子,可编码832个氨基酸。除去24个氨基酸残基的信号序列,成熟的dPRLR包含808个氨基酸残基,分子量约为91.5 kDa。成熟的dPRLR的可以分为三个域,胞外域、跨膜域和胞内域。胞外域(ECD)包含两个串联重复的单元,称为远膜单元和近膜单元,分别含有204和212个氨基酸。每个重复单元包含有两对保守的Cys残基和一个WS基序,两个WS基序均由WSEWS构成,两个重复单元间具有66.7%的相似性。位于蛋白中间的跨膜域有24个氨基酸残基。胞内域(ICD)位于C端包含368个氨基酸残基,在胞内域含有两个保守的区,分别称为Box1和Box2。所有这些特征同鸡以及哺乳动物PRLR一致,说明北京鸭PRLR的作用机制类似于其它物种。序列相似性分析表明北京鸭PRLR同其它物种相比在核酸水平上具有44.8%~96.5%的相似性,在氨基酸水平上具有29.6%~96.1%的相似性,同家鹅的相似性最高。进化分析表明北京鸭催乳素受体与家鹅、火鸡、鸡、鸽子的催乳素受体进化关系较近。半定量PCR结果显示PRLR mRNA在北京鸭肝脏、胸肌、肾脏、睾丸、卵巢均有表达,在肾脏中的表达量最高。2.利用RT-PCR技术扩增获得了北京鸭ESRα和ESRβ的部分cDNA序列。ESRα部分序列长1593bp,可编码531个氨基酸(GenBank登录号EF205052);ESRβ部分序列长1085bp,可编码361个氨基酸(GenBank登录号EF621308)。序列特征分析表明,两序列均可分为五个域A/B、C、D、E。比对分析显示ESRα和ESRβ各域的相似性分别为:A/B为11.5%,C为90%,D为30%,E为35%。可见C域在ESRα和ESRβ中高度保守,说明ESRα和ESRβ具有相似的目标作用基因。核定位信号预测结果表明,ESRα含有两个核定位信号区,一个位于C域,另一个位于D域;ESRβ只有一个核定位信号区位于C域。ESR mRNA表达分析表明不管ESRα还是ESRβ在母鸭中的表达量均高于公鸭。在肾脏中ESRα的表达量明显低于ESRβ;在睾丸和卵巢中均是ESRα的表达量明显高于ESRβ;在肝脏中两者几乎一样。3.获得PRLR基因由1325个碱基组成的部分DNA序列(GenBank登录号EF502053),该序列有一个长为635bp内含子。外显子部分可编码230个氨基酸。序列分析表明,该序列由第9外显子的一部分(57bp)、第9内含子(635bp)、以及第10外显子的一部分(633bp)组成。可为发掘催乳素受体多态性位点提供基础。