背景和目的：胃癌是多年来一直影响着人类身心健康的恶性肿瘤之一,目前其发病率在全球范围内处于肿瘤的第四位,死亡率已处于癌症的第二位。胃癌的发生是多个基因突变的结果,是一个多阶段、多种影响因素的复杂过程。多年来,许多学者在胃癌的发生机制及预后方面做了大量研究,但是目前其发生机制尚未完全阐明,且没有一个指标能较好地预测胃癌患者的生存期。其中,抑癌基因表达的下调是胃癌发生的一个重要原因,因此上调抑癌基因的表达为开发新型抗胃癌药物提供了一个重要思路。VEZT基因是本课题组新近发现的胃癌相关候选抑癌基因,其编码的蛋白是一种跨膜蛋白,包括三部分,即较短的膜外部、跨膜部和较长的膜内部,其中膜内部与肌球蛋白VⅡa (myosin Ⅶa)相连。肌球蛋白Ⅶa及其配体VEZT蛋白共同定位粘合连接于E-钙粘蛋白上,发挥类似于E-钙粘蛋白的作用,具有增加上皮细胞间相互粘附的作用,对保证上皮组织极性和完整性也具有重要作用。本课题组在前期的研究工作中,利用QRT-PCR技术在体外培养的5种胃癌细胞系及术后胃癌组织标本中均检测到VEZT基因的mRNA表达水平比在正常胃黏膜上皮细胞GES-1及癌旁正常胃粘膜组织标本中低。该研究结果表明,VEZT基因有作为胃癌相关候选抑癌基因的潜力,有望成为潜在的抗肿瘤治疗靶点之一。但是,VEZT基因在胃癌细胞中的定位,与胃癌患者的临床病理特征及预后的关系尚未完全阐明。因此,本研究对VEZT蛋白和E-钙粘蛋白在胃癌细胞中进行了定位,探讨了VEZT蛋白在胃癌组织与癌旁正常组织中的表达,并分析了其与患者临床病理特征及预后的关系。为了更加深入的了解VEZT在胃癌发生发展中的生物学功能,我们将VEZT基因克隆入pEGFP-N1构建其过表达载体,为进一步深入研究VEZT在胃癌发生、发展过程及治疗中的作用提供基础。方法：通过免疫荧光技术对VEZT蛋白和E-钙粘蛋白在SGC-7901胃癌细胞中进行了定位,采用免疫组织化学法检测119例术后胃癌组织标本及其相应癌旁正常组织中VEZT蛋白的表达,并分析其与胃癌患者临床病理特征及预后的关系。从人肾小管上皮293T细胞中提取总RNA,利用PCR方法扩增出VEZT基因片段,经酶切、纯化,利用DNA重组技术将目的基因片段VEZT连接于pEGFP-N1真核表达载体上,构建重组质粒载体,分别用酶切、1.0%琼脂糖凝胶电泳及DNA测序、对比分析等对重组质粒载体进行鉴定。结果：1、VEZT蛋白主要表达于胃癌细胞的细胞膜及细胞质中,E-钙粘蛋白主要表达于胃癌细胞膜上,两者有部分重叠。2、胃癌组织标本中VEZT的阳性表达率为30.25%,显著低于相应癌旁正常组织中VEZT的阳性表达率60.50%(P<0.05)。3、胃癌组织标本中VEZT的阳性表达率与胃癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移具有相关性(均P<0.05),而与患者的年龄、肿瘤大小无相关性(均P>0.05)。4、单因素生存分析显示VEZT的表达与胃癌患者的预后相关(P<0.05)。5、酶切电泳分析得到的目的片段,大小与理论值一致,DNA测序、对比证实目的基因序列无突变。结论：1、VEZT蛋白主要表达于细胞膜及细胞质中,部分与E-钙粘蛋白连接。2、VEZT蛋白在胃癌组织中表达下调,与胃癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移呈负相关。VEZT阳性表达是胃癌患者的独立预后保护因素。3、VEZT基因真核过表达载体构建成功。