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超饲养(Overfeeding)引起鹅肝脏代谢发生改变,使得大量脂肪沉积在肝脏中形成肥肝(fatty liver)。不同品种鹅对超饲养导致的肝脏代谢改变的敏感程度不同,所以肥肝性能差异很大。但目前鹅肥肝形成的分子机理仍然不清楚。本研究以朗德鹅和溆浦鹅为试验材料,利用mRNA差异显示技术和荧光定量PCR技术,对两个品种之间、肥肝和普通肝脏之间差异表达基因进行了分离和鉴定,并通过生物信息学方法从蛋白质和核酸两个水平上进行了结构与功能预测,取得了如下研究结果:实验使用了90对差异显示引物来研究两个品种鹅肥肝和普通肝脏中mRNA表达水平对超饲养的反应情况,并用荧光定量PCR进行了验证。6个基因被证实在肥肝和普通肝脏之间差异表达,其中3个基因表达水平被上调,2个基因被下调,1个基因在两个品种试验鹅中表现了相反的调控状态。基因8216的表达水平在肥肝中被上调了,并且朗德鹅肝脏(LL和LFL)中的表达水平高于溆浦鹅(XpL和XpFL)。这个基因的全长cDNA是1797bp,GenBank登陆号:EF488993,经过比对,这个基因的全长cDNA序列与鸡硒结合蛋白1(selenium binding protein 1,SELENBP1;XM 423397.2)基因有92%的同源性。序列分析发现,这个cDNA序列含有一个1413bp的开放读码框(ORF),编码一个471个氨基酸的蛋白质。这个蛋白质中含有一个56 kDa的硒结合蛋白(SBP56)保守结构域。聚类分析表明,该蛋白质与鸡、大鼠、人、猴、狗、牛、小鼠的SBP56蛋白分别具有95%、86%、86%、86%、86%、86%、84%的同源性。组织表达分析显示,鹅基因8216在肝脏和肾脏中表达丰富,在脾脏中中等表达,在卵巢、子宫、肌胃和腹脂中表达量较低。基因9105的表达水平在肥肝中被上调了。经过cDNA克隆,得到一个包含全长CDS的1248bp的cDNA片段,GenBank登陆号:EF541127。比对的结果表明,该片段与鸡的转化生长因子β-2 mRNA(transforming growth factor beta 2,TGFB2;NM001031045.1)有94%的同源性,与其它物种的TGFB2也有很高的同源性。序列分析发现,这个cDNA序列含有一个1239bp的开放读码框架(ORF),编码一个有412个氨基酸的蛋白质。BlastP分析表明,该蛋白质序列存在着2个保守的功能域,一个是引导序列(TGFb前肽),另一个是功能结构域(TGFβ)。聚类分析表明,该蛋白质与鸡、非洲爪蛙、大鼠、人、短尾猊、牛、小鼠、猪、绵羊的TGFb2蛋白分别具有99%、96%、87%、90%、91%、89%、88%、90%、89%的同源性。组织表达分析显示,鹅基因9105在肌胃中表达很丰富,在肝脏、脾脏和卵巢中表达也较丰富,在子宫、肺和肌肉中中等表达,而在肾脏和腹脂中表达量较低。基因7501的表达水平在肥肝中被上调了,肥肝中(LFL和XpFL)高于普通肝脏(LL和XpL),朗德鹅(LL和LFL)高于溆浦鹅(XpL和XpFL)。经过cDNA克隆,得到一个1446bp的cDNA片段。经过比对,这个基因的部分cDNA序列与鸡的细胞质NADP(+)-依赖型苹果酸酶1mRNA(malic enzyme 1,NADP(+)-dependent,cytosolic,ME1;NM204303.1)有93%的同源性,与其它物种的ME1也有很高的同源性。组织表达分析显示,鹅基因7501在肝脏中表达很丰富,在脾脏、卵巢、子宫、肺、肾脏、肌胃和肌肉中中等表达,而在腹脂中表达量最低。基因8407的表达水平在肥肝中被下调了。经过cDNA克隆,得到一个包含全长CDS的1269bp的cDNA片段,GenBank登陆号:EF541128。比对的结果表明,该片段与鸡的细胞质异柠檬酸脱氢酶mRNA(cytosolic NADP-dependent isocitrate dehydrogenase,IDH1;XM421965)有95%的同源性,与其它物种的IDH1也有很高的同源性。序列分析发现,这个cDNA序列含有一个1248bp的开放读码框架(ORF),编码一个有415个氨基酸的蛋白质。BlastP分析表明,该蛋白质序列存在着一个保守的结构域,这个结构域与已知的真核蛋白Icd具有较高的同源性。聚类分析表明,该蛋白质与鸡、大鼠、人、猿、牛、小鼠的Icd蛋白分别具有99%、89%、90%、90%、88%、88%的同源性。组织表达分析显示,鹅基因8407在肝脏中表达丰富,在脾脏、肾脏和肌胃中中等表达,在卵巢、子宫、肺、肌肉和腹脂中表达量较低。基因9302的表达水平在肥肝中被下调了。经过cDNA克隆,得到一个943bp的cDNA片段。经过比对,这个基因的部分cDNA序列与鸡的胆固醇-7α羟化酶基因(Cytochrome P450,family 7,subfamily A,polypeptide 1,CYP7A1;XM419217)有93%的同源性。组织表达分析显示,鹅基因9302在肝脏中表达很丰富,在其它组织中不表达。基因7102的表达水平在两种鹅中表现了相反的调控状态,朗德鹅肥肝中基因7102的表达水平被上调了,而在溆浦鹅肥肝中被下调了。经过cDNA克隆,得到一个923bp的cDNA片段。经过比对,这个基因的部分cDNA序列与鸡的NAD依赖型苹果酸脱氢酶基因(malate dehydrogenase 1,NAD(soluble),mRNA,MDH1;NM001006395.1)有95%的同源性,与其它物种的MDH1基因也有很高的同源性。组织表达分析显示,鹅基因7102在肝脏中表达很丰富,在其它组织中表达量较低。鹅通过短期内超饲养(Overfeeding)大量高能饲料可以形成肥肝。在肥肝发生过程中,肝脏的氧化应激增强,造成自由基在肝脏中大量产生,对肝细胞和肥肝品质产生了影响。本试验研究采用单因子梯度设计,研究日粮中添加不同水平的茶多酚对超饲养朗德鹅脂肪代谢和肝脏抗氧化性能的影响。试验鹅被分为5组,以第1组为对照组,其余4组为试验组,每组饲喂含不同水平茶多酚的日粮,4个试验组超饲养日粮中茶多酚的浓度分别为:40、80、160、320mg/Kg。通过对屠宰性能、血清生化指标和肝脏抗氧化指标的分析,取得了如下的研究结果:经过21天的超饲养,每只鹅的平均超饲养量大致相同(13.54-0.23Kg)。屠宰后对各项屠宰指标的分析结果表明,各组之间屠宰率、半净膛率、全净膛率、胸肌重和腿肌重等没有显著性差异(p>0.05),体重和体增重呈现了显著的下降趋势(p<0.01):腹脂重与超饲养后体重的比值和肥肝重都表现了先上升然后下降的趋势,但总体来说变化不显著。这些结果说明,茶多酚对肝脏中脂肪的合成与沉积,以及合成后脂类在机体中的分布都没有显著的影响。血清中生化指标的分析结果表明,甘油三酯(TG)水平的变化与肥肝重的变化基本上是一致的,总胆固醇(TC)水平总体来说是下降的,但试验组之间没有差异(p>0.05),而与对照组有极显著的差异(p<0.01),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平相对平稳,总体上各组之间差异不显著(p>0.05),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平有显著的下降(p<0.01),球蛋白与清蛋白的比例、谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)都没有显著性的变化(p>0.05)。这些结果说明,茶多酚可能影响了肝脏与外周组织之间脂类转运的状态,但对机体的免疫系统功能没有产生影响。肝脏中抗氧化指标的分析结果表明,日粮中不同茶多酚水平对肝脏总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的影响表现出了相同的趋势,但总体来说,在本试验条件下,肝脏中总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性在各组之间基本稳定,但肝脏中丙二醛水平随着日粮中茶多酚添加水平的上升显著下降的趋势(p<O.01)。这些结果说明,茶多酚被吸收进入机体或细胞后,抑制了机体组织或细胞中的脂质过氧化反应,但其所产生的保护作用可能是通过茶多酚本身的某些成分和一些代谢产物而独立发挥作用的,茶多酚在机体中的抗氧化功能可能不是通过与机体内其它抗氧化体系相互作用而产生。