【摘 要】
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本试验旨在研究分子佐剂FliC、CD40L和EDA对鸡巨型艾美耳球虫蛋白EmIMP1的佐剂效应。首先,克隆目的片段EmIMP1、FliC-EmIMP1、EmIMP1-CD40L、FliC-EmIMP1-CD40L、EDA-EmIMP1,构建表达载体pET-28a-EmIMP1、pET-28a-FliC-EmIMP1、pET-28a-EmIMP1-CD40L、pET-28a-FliC-EmIMP1-
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本试验旨在研究分子佐剂FliC、CD40L和EDA对鸡巨型艾美耳球虫蛋白EmIMP1的佐剂效应。首先,克隆目的片段EmIMP1、FliC-EmIMP1、EmIMP1-CD40L、FliC-EmIMP1-CD40L、EDA-EmIMP1,构建表达载体pET-28a-EmIMP1、pET-28a-FliC-EmIMP1、pET-28a-EmIMP1-CD40L、pET-28a-FliC-EmIMP1-CD40L、pET-28a-EDA-EmIMP1。然后,将表达载体分别转化至感受态BL21,IPTG诱导表达后获得重组蛋白。SDS-PAGE和Western-blot结果显示:EmIMP1的大小约60kDa;FliC-EmIMP1的大小约为 90kDa;EmIMP1-CD40L 的大小约 90kDa;EDA-EmIMP1 的大小约为70kDa;FliC-EmIMP1-CD40L 大小约 120kDa。最后,用纯化后的蛋白免疫两周龄的雄性海兰褐蛋鸡,两周后,进行第二次免疫,两周后进行巨型艾美耳球虫感染实验。从平均体增重、增重率、排出卵囊数量、排出卵囊减少率、肠道病变记分、血清中IgG、IgA含量、血清中IgG效价、外周血单核淋巴细胞分泌IFN-y量这几个方面对分子佐剂效果进行评价。本实验获得的结果如下:FliC、CD40L、EDA作为蛋白EmIMP1的分子佐剂均可以起到免疫增强作用。各组血清IgG效价都可达1:1600。其中分子佐剂EDA的效果最好,该组鸡的平均体增重为（54.16±2.12）g,同空白对照组差异不显著（p>0.05）;卵囊排出减少率高达40.40%,同其余分子佐剂组对比最高。双分子佐剂疫苗FliC-EmIMP 1-CD40L卵囊排出减少率为40.13%,同分子佐剂EDA的差异不显著（p>0.05）,但与单分子佐剂FliC和单分子佐剂CD40L存在显著差异（p<0.05）,说明双分子佐剂比单分子佐剂的效果好。从IFN-γ分泌量看,三种分子佐剂同空白对照组存在显著差异（p<0.05）,三者均可引起细胞免疫。体液免疫方面,血清中检出的IgA含量很低,但是同空白对照组存在显著差异（p<0.05）;分子佐剂组血清中的IgG与空白对照组相比均存在显著差异（p<0.05）,其中含量最多的为EDA。双分子佐剂FliC-EmIMP1-CD40L 同 FliC-EmIMP1 和 EDA-EmIMP1 差异不显著（p>0.05）。EmIMP1-CD40L 血清中产生的 IgG 较少。结论:分子佐剂FliC、CD40L和EDA可以促进球虫蛋白EmIMP1的免疫作用。各分子佐剂均可以引起鸡的体液免疫和细胞免疫应答,可对巨型艾美耳球虫的攻虫起到一定的抵抗作用。其中,单分子佐剂疫苗EDA-EmIMP1和双分子佐剂疫苗FliC-EmIMP1-CD40L效果较好。
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