目的1、探讨二氮嗪预处理抗缺氧复氧后大鼠海马神经元凋亡的同时,是否对Akt、Bcl-2和Bax蛋白表达产生影响。2、在前一实验的基础上,探讨二氮嗪预处理对缺氧复氧后大鼠海马神经元Bcl-2、Bax蛋白表达的影响是否经或部分经Akt信号通路介导的。方法1、将海马神经元分为正常对照组(A组)、缺氧组(B组)、缺氧+DZ预处理组(C组)、缺氧+DZ+5-HD预处理组(D组)、缺氧+5-HD预处理组(E组),每次实验每组采用16孔或2孔,实验重复3次。自缺氧前2天开始,缺氧组(B组)、缺氧+DZ预处理组(C组)、缺氧+DZ+5-HD预处理组(D组)、缺氧+5-HD预处理组(E组)分别加入终浓度为DZ 0μmol/L、DZ 100μmol/L、DZ 100μmol/L+5-HD 100μmol/L、5-HD 100μmol/L预处理。复氧后24小时,观察海马神经元状态的变化;四唑蓝比色法行细胞活力测定;流式细胞术检测海马神经元的凋亡率;Western blot法测定海马神经元Akt、Bcl-2、Bax蛋白的表达程度。2、将海马神经元分为正常对照组(A组)、缺氧组(B组)、缺氧+DZ预处理组(C组)、缺氧+DZ+LY294002预处理组(D组),每次实验每组16孔或2孔,实验重复3次。自缺氧前2天开始,缺氧组(B组)、缺氧+DZ预处理组(C组)、缺氧+DZ+LY294002预处理组(D组)分别加入终浓度为DZ 0μmol/L、DZ 100μmol/L、DZ 100μmol/L+LY294002 50μmol/L预处理。复氧后24小时,观察海马神经元状态的变化;四唑蓝比色法行细胞活力测定;流式细胞术检测海马神经元的凋亡率;Western blot法测定海马神经元Akt、Bcl-2、Bax蛋白的表达程度。结果1、C组较其它三组缺氧组,存活的神经元的数目较多,形态较好,细胞坏死脱落较少,细胞间连接存在;C组海马神经元的活力显著低于A组(P<0.01),但明显高于其它三组缺氧组(P<0.01);C组海马神经元的早期凋亡率显著高于A组(P<0.01),但明显低于其它三组缺氧组(P<0.01);C组海马神经元与A组比较,Akt、Bcl-2、Bax蛋白表达均增强(P<0.01),与其它三组缺氧组比较,Akt、Bcl-2蛋白表达增强(P<0.01),Bax蛋白表达减弱(P<0.01)。2、与C组比较,D组中大量细胞坏死脱落,残余细胞稀疏,失去正常形态,细胞间连接减少;D组海马神经元的活力显著低于C组(P<0.01),与B组比较差别无统计学意义(P>0.05);D组海马神经元的早期凋亡率显著高于C组(P<0.01),与B组比较差别无统计学意义(P>0.05);D组与C组比较,Akt、Bcl-2蛋白的表达均减弱(P<0.01),Bax蛋白的表达增强(P<0.01);与B组比较,Akt、Bcl-2、Bax蛋白的表达差别均无统计学意义(P>0.05)。结论1、二氮嗪预处理使缺氧复氧后大鼠海马神经元的活力提高,早期凋亡率降低。二氮嗪预处理使缺氧复氧后大鼠海马神经元的Akt、Bcl-2蛋白表达增强,Bax蛋白表达减弱。2、二氮嗪预处理使缺氧复氧后大鼠海马神经元Bcl-2蛋白表达增强、Bax蛋白表达减弱是经或部分经Akt信号通路介导的。