论文部分内容阅读
目的： 探讨选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂逆转肺癌对顺铂耐药的作用，并从分子水平研究其机制。 方法： 1.首先构建肺癌A549/DDP细胞裸鼠移植瘤模型。 2.药物干预：将荷瘤裸鼠随机分为4组：对照组（腹腔注射生理盐水和胃内灌注0.5％羟甲基纤维素钠）；尼美舒利(NIM)组（胃内灌注尼美舒利溶液）；顺铂(DDP)组（腹腔注射顺铂溶液）；NIM与DDP联合组（腹腔注射顺铂溶液和胃内灌注尼美舒利溶液）。NIM连续灌胃21天，DDP每4天腹腔注射1次，共5次。给药期间，观察裸鼠的一般状况、测量瘤径及鼠重，绘制肿瘤生长曲线。 3.计算抑瘤率：给药3周后处死裸鼠，剥离移植瘤，检测各组移植瘤重量、体积，计算抑瘤率。 4.用液相色谱-质谱联用法测定各组肺癌A549/DDP裸鼠移植瘤细胞内的DDP浓度，以明确NIM逆转肺癌顺铂耐药的作用。 5.免疫组化法检测各组肺癌A549/DDP裸鼠移植瘤细胞内耐药相关因子P-gp、LRP、MRP1的蛋白表达水平，探讨NIM逆转肺癌顺铂耐药作用的机制。 结果： 1.成功构建肺癌A549/DDP细胞裸鼠移植瘤模型。 2.NIM有抑制肺癌生长的作用，瘤体体积及瘤重抑瘤率分别为22.63%和15.98%。NIM与DDP联合用药后抑瘤作用更明显，瘤体体积及瘤重抑瘤率分别为60.83%和46.76%，分别明显大于NIM组、DDP组及对照组的抑瘤率，差异有统计学意义（P﹤0.05），NIM有增强肺癌细胞对DDP敏感性的作用。 3.液相色谱-质谱检测结果表明，NIM与DDP联合组移植瘤肺癌A549/DDP细胞内的DDP浓度(700.53±81.92ng/ml)，明显大于DDP单独干预组的顺铂浓度(334.07±84.98ng/ml)，差异有统计学意义（P﹤0.05），NIM可增加肺癌A549/DDP细胞内的DDP浓度，有逆转肺癌DDP耐药的作用。 4.免疫组化结果显示：P-gp、LRP、MRP1耐药基因在肺癌A549/DDP裸鼠移植瘤细胞内均呈阳性表达，P-gp于胞膜或胞质呈棕黄色弥漫分布表达；LRP于胞质呈棕黄色弥漫分布表达；MRP1于胞核或胞质呈棕黄色弥漫分布表达；P-gp、LRP、MRP1在NIM组中的阳性表达分别与其在对照组中的阳性表达相比，无显著性差异（P＞0.05）；NIM与DDP联合组P-gp阳性表达，分别显著低于其在NIM组、DDP组及对照组中的表达，差异有统计学意义（P＜0.05）；NIM与DDP联合组LRP阳性表达，分别显著低于其在NIM组、DDP组及对照组中的表达，差异有统计学意义（P＜0.05）；NIM与DDP联合组MRP1阳性表达，分别显著低于其在NIM组、DDP组及对照组中的表达，差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论： 1.选择性COX-2抑制剂NIM有抑制肺癌生长的作用，并有增强肺癌细胞对DDP敏感性的作用； 2.选择性COX-2抑制剂NIM有逆转肺癌对DDP耐药的作用； 3.选择性COX-2抑制剂NIM逆转肺癌对DDP耐药的机制，可能与下调肺癌细胞耐药因子P-gp、LRP、MRP1蛋白表达有关； 4.NIM对肺癌生长的抑制效应、逆转肺癌对DDP的耐药作用、及其增强肺癌细胞对DDP敏感性的作用，在肺癌治疗中有重要意义，推测COX-2抑制剂有可能成为肺癌综合治疗的一个新靶点。