姜黄素类化合物的提纯及性能研究

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姜黄是一种传统的多年生草本植物,历来可以药食两用,在我国的东南和西南部广泛种植。因其有通经止痛、驱寒消炎、散风活血等功效,在中药领域应用较多。姜黄素类化合物是姜黄的主要功效成分,因其染色效果好且安全性高,一直作为天然色素应用于食品行业。姜黄素类化合物还具有抗氧化、抗癌及清除自由基等作用,已作为抗癌药物投入临床使用,且在化妆品行业显示了很好的抗氧化和美白的功效。近来,姜黄素类化合物保健食品的研究也越来越多。本论文主要对姜黄根茎中姜黄素类化合物的检测、提取、纯化方面进行了研究,并对姜黄素类化合物及其纯化液的抗氧化性进行了探讨。主要研究内容及结果如下:首先,以姜黄根茎为原料,建立HPLC法检测姜黄根茎中三种姜黄素类化合物含量的方法,并对不同产地、年份的姜黄及姜黄素饮料样品进行检测,验证了方法的可靠性。建立的HPLC法为:采用色谱柱DIKMA Platisil ODS柱[4.6×250 mm,5μm]为分离柱,流动相乙腈-水(用磷酸调pH 3.0)为洗脱液,梯度洗脱程序0~10 min,乙腈浓度为60%,10~15 min,乙腈浓度由60%升到65%,15~20 min,乙腈浓度由65%降到60%,流速1 mL/min,柱温30°C,检测波长415 nm,进样量为20μL。方法的精密度、稳定性和重现性良好,测定结果可靠。其次,以2015年缅甸瓦城产区姜黄为原料,试验比较得出超声波辅助提取法较适合姜黄中姜黄素类化合物的提取。以姜黄素类化合物得率为指标,以乙醇浓度、料液比、提取温度、提取时间和超声功率为试验因素,利用单因素试验、PB试验及响应面试验,优化了超声波辅助提取法提取姜黄素类化合物的最佳工艺为:乙醇浓度80.4%,料液比1:21.9 g/mL,提取温度41°C,提取时间40 min,超声功率200 W,此时姜黄素类化合物得率为4.43%,提取率为92.87%。优化后的提取方法可以大大提高姜黄素类化合物的提取率。再次,以姜黄素类化合物吸附率和解吸率为指标,通过对大孔树脂、阴离子交换树脂和阳离子交换树脂这三类树脂进行筛选,得出大孔树脂较适合纯化姜黄素类化合物;从AB-8、ADS-17、S-8、D101、DM130、DA201、HPD-100、HPD-400、HPD-600、HPD-750这10种大孔树脂中筛选出最适合纯化姜黄素类化合物的大孔树脂为DA201。在静态研究的基础上,采用动态吸附和解吸的方法,得出最佳大孔树脂DA201纯化姜黄素类化合物的最优工艺为:径高比1:10,上样液pH值6.0,上样流速2 BV/h,上样浓度中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的浓度分别为286.39 mg/L、267.90 mg/L、324.23 mg/L,总姜黄素类化合物浓度为878.52 mg/L,上样体积为3.5~4 BV;解吸流速2 BV/h,解吸液浓度90%~100%,解吸液体积为5.25BV。此时双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的纯化回收率分别为95.78%、91.34%、79.92%,姜黄素类化合物的纯度达55.90%,比纯化前提高了42.23%。最后,研究了姜黄素类化合物体外的抗氧化性,包括清除ABTS+·、DPPH·、OH·、O2-·等能力、螯合亚铁离子能力和还原铁能力。研究结果得出:姜黄素类化合物具有清除ABTS+·、DPPH·、OH·、O2-·等能力、螯合亚铁离子能力和还原铁能力,且在一定浓度范围内随着浓度的增加,抗氧化能力增强。姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素的抗氧化性具有差异性,其抗氧化能力与姜黄素类化合物本身的化学结构有关,苯环上的羟基氢、β-二酮中间的亚甲基氢和酚羟基的数目以及化学环境均可影响其抗氧化活性。
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