八仙花再生体系建立及遗传转化体系研究

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八仙花[Hydrangea macrophylla(Thunb.)Ser]花大色艳,花期长,是一种观赏价值极高的花卉,可作为微型盆栽、切花、或是在公园、庭院等园林配置中应用。本文对不同基因型矮化盆栽八仙花的组培快繁技术进行研究,为其工厂化生产提供科学依据。通过对激素种类、培养条件、接种方式等条件的比较研究,建立了八仙花稳定高效的再生体系,并对根癌农杆菌介导的遗传转化体系进行了初步研究。其主要研究结果如下:(1)八仙花快繁体系建立以’Hyd1’、’Hyd4’和‘Hyd5’三个基因型八仙花的带芽茎段作为外植体,对其组培快繁技术进行研究。结果表明:三个基因型茎段均在B5+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/LNAA培养基上增殖效果最好,增殖系数都达到了3.0以上。‘Hyd1’基因型的最佳生根培养基为:60 mL珍珠岩+30 mL液体培养基(1/2 B5+0.5 mg/L IBA),30天后生根率为100.0%。生根苗无需清洗和炼苗,直接移栽至珍珠岩和泥炭土(1:3)的基质中,移栽成活率高达100.0%。(2)八仙花再生体系的建立以八仙花叶片和叶柄作为外植体,对其直接和间接再生体系进行研究。不同基因型八仙花的再生能力差异较大,‘Hyd1’基因型叶片在培养基B5+2.25 mg/L 6.BA+ 0.1 mg/LIBA+1.0 mg/LAgNO3上,暗培养20天,再生频率和平均再生芽数分别为96.3%和3.0。而相同培养条件,‘Hyd4’和‘Hyd8’叶片的再生频率仅为26.7和10.0%。对于‘Hyd1’基因型的间接再生,1.0-1.5 mg/L KT和1.0 mg/L 2,4-D的组合叶片和叶柄的愈伤诱导率均为100.0%;将愈伤组织接种到B5+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA培养基上,有不定芽分化形成,分化率为26.7%。(3)八仙花遗传转化体系的研究以‘Hyd1’八仙花叶片为转化受体的根癌农杆菌介导遗传转化体系进行初步研究。确定叶片不定芽再生的筛选压为20.0 mg/L Km,再生苗生根的筛选浓度为200.0mg/L Km,200.0 mg/L Cef作为抑菌剂。通过GUS基因瞬时表达的方法,比较了预培养时间、侵染时间和共培养时间对八仙花遗传转化的影响。结果表明:叶片在预培养0d,侵染35.0 min和共培养3.0 d的条件下,叶片GUS瞬间表达率最高,可达100.0%。并在该转化条件下获得了抗性愈伤组织和10个再生苗。
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