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目的:探讨诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)在慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)患者肝组织内的表达及与肝组织病变的关系和临床意义。方法:1.研究对象:CHB患者74例,为2007年3月至2007年8月在山东大学齐鲁医院肝病科住院和门诊患者,临床、肝穿刺组织病理诊断均符合2000年第十次全国病毒性肝炎及肝病学术会议修订的《病毒性肝炎防治方案》中的诊断标准。正常肝组织7例,为手术切除的肝血管瘤或肝包虫囊肿外正常肝组织(甲～戊型肝炎病毒及巨细胞病毒、EB病毒检测均为阴性)。2.研究方法:肝穿组织及正常肝组织常规进行HE染色,并做出病理分级和分期诊断。肝组织内iNOS的表达采用免疫组化EnVosion两步(非生物素)染色法检测。细胞浆和/或细胞膜见到棕黄色或棕褐色颗粒沉着为阳性细胞。染色结果综合染色强度及阳性细胞数量两个方面进行半定量分析。3.统计学分析:结果用均数±标准差((?)±s)表示,采用SPSS13.0统计分析软件。两组间比较采用非参数Mann-Whitney U检验,相关性分析采用Spearman’s等级相关。P＜0.05为差异具有统计学意义。结果:1.CHB患者肝组织中iNOS的表达7例正常肝组织均未见到iNOS阳性信号,74例CHB患者肝组织中iNOS阳性率71.6%,与正常肝组织相比表达明显增高,差异有统计学意义(P＜0.01)。iNOS阳性信号在CHB患者肝组织内呈棕黄色或棕褐色,均质或颗粒状染色,弥漫或灶状分布,以肝细胞胞浆表达最为明显,亦有胞膜染色。枯否细胞、窦内皮细胞、血管内皮细胞中也可见iNOS表达。2.ALT异常组与ALT正常组比较ALT异常组iNOS的积分1.50±0.97,ALT正常组iNOS的积分0.73±0.82,差异有显著的统计学意义(P=0.001)。iNOS的表达与ALT水平呈明显正相关(r=0.601,P=0.000)。3.iNOS的表达与肝脏病变的关系CHB患者肝组织内iNOS表达强度与肝组织炎症分级程度和纤维化分期之间呈显著正相关(r=0.660,P=0.000;r=0.506,P=0.000),随炎症和纤维化程度的加重而增强。4.iNOS的表达在HBeAg阳性和阴性组间的比较及与HBV DNA浓度的相关关系HBeAg阳性组iNOS的积分1.00±0.87,HBeAg阴性组iNOS的积分1.20±0.99,二者相比差异无统计学意义(P＞0.05)。iNOS表达强度与血清及肝组织HBV DNA浓度间也无明显相关性(r=0.07,P＞0.05;r=0.03,P＞0.05)。结论:CHB患者肝组织内iNOS表达显著增高,并随着肝脏炎症和纤维化程度的加重表达增强,与CHB病变进展密切相关。目的:探讨慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclearcells,PBMCs)a干扰素受体2(IFN-a receptor 2,IFNAR2)mRNA的表达与肝脏病变、病毒载量及肝组织内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的关系。方法:1.研究对象:CHB患者66例,为2007年3月至2007年8月在山东大学齐鲁医院肝病科住院和门诊患者,临床、肝穿刺组织病理诊断均符合2000年第十次全国病毒性肝炎及肝病学术会议修订的《病毒性肝炎防治方案》中的诊断标准,排除甲、丙、丁、戊型肝炎病毒及其他病毒重叠感染,排除其它原因所导致的肝脏损害,入组前半年内未用过干扰素、拉米夫定、阿德福韦等抗病毒药物及免疫调节剂,无其他系统疾病。正常对照组10例,均为身体健康者。2.研究方法:抽取4ml肝素抗凝血,密度梯度离心法分离PBMCs,计数约10~6～10~7,用RNAiso Reagent试剂按说明抽提细胞总RNA。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增IFNAR2 mRNA和β-actin mRNA。PCR产物在1.5%琼脂糖凝胶上电泳分离,结果用凝胶成像系统分析。以IFNAR2 mRNA/β-actinmRNA的光密度比值评价PBMCs中IFNAR2 mRNA的表达水平。CHB患者肝穿组织常规进行HE染色,并做出病理分级和分期诊断。肝组织内iNOS的表达采用免疫组化En Vosion两步(非生物素)染色法检测。3.统计学分析:结果用均数±标准差((?)±s)表示,采用SPSS13.0统计分析软件。两组间比较采用非参数Mann-Whitney U检验,相关性分析采用Spearman’s等级相关。P＜0.05为差异具有统计学意义。结果:1.CHB患者PBMCs IFNAR2 mRNA的表达66例CHB患者中,PBMCsIFNAR2 mRNA阳性者53例(80.3%),10例对照组中,PBMCs IFNAR2 mRNA阳性者7例(70%)。CHB患者组PBMCs IFNAR2 mRNA的表达值高于正常对照组(0.54±0.45 vs.0.27±0.17),但二者之间差异无统计学意义(P=0.143)。2.PBMCs IFNAR2 mRNA的表达与ALT的关系ALT异常组(40例)PBMCsIFNAR2 mRNA阳性者34例(85%),表达值:0.50±0.42;ALT正常组(26例)PBMCs IFNAR2 mRNA阳性者19例(73%),表达值:0.60±0.50,二者无统计学差异(P＞0.05)。PBMCs IFNAR2 mRNA表达与ALT水平无明显相关性(r=-0.06,P=0.66)。3.PBMCs IFNAR2 mRNA的表达在HBeAg阴性组和阳性组之间的比较及与HBV DNA浓度的关系HBeAg阴性组PBMCs IFNAR2 mRNA表达阳性率95%(19/20),HBeAg阳性组IFNAR2 mRNA表达阳性率73.9%(34/46),HBeAg阴性组PBMCs IFNAR2 mRNA的表达明显高于HBeAg阳性组(0.83±0.57 vs.0.37±0.25,P=0.004)。CHB患者中血清HBV DNA阴性组PBMCs IFNAR2 mRNA的表达阳性率为90.9%(20/22),血清HBV DNA阳性组PBMCs IFNAR2 mRNA的表达阳性率为75%(33/44),血清HBV DNA阴性组PBMCs IFNAR2 mRNA的表达明显高于HBV DNA阳性组(0.74±0.55 vs.0.41±0.33,P=0.011)。血清和肝组织HBV DNA病毒载量分别取自然对数,与PBMCs IFNAR2 mRNA的表达值进行相关性分析,结果是二者均无明显相关性(r=0.06,P=0.74;r=-0.25,P=0.08)。4.PBMCs IFNAR2 mRNA的表达与肝脏病变的关系统计结果显示CHB患者PBMCs IFNAR2 mRNA的表达与肝组织炎症分级和纤维化分期之间无明显相关性(r=-0.044,P=0.76;r=-0.182,P=0.19)。5.PBMCs IFNAR2 mRNA的表达与肝组织内iNOS的表达的关系CHB患者肝组织内iNOS表达显著增高,但肝组织内iNOS的表达与IFNAR2 mRNA的表达无明显相关性(r=0.147,P=0.294)。结论:CHB患者PBMCs IFNAR2 mRNA的表达在血清HBeAg阴性组和HBV DNA阴性组的表达分别高于HBeAg阳性组和HBV DNA阳性组,表明在慢性长期感染中HBV病毒可能通过下调IFNAR的表达来拮抗干扰素效应。而PBMCsIFNAR2 mRNA的表达与ALT、肝组织炎症分级和纤维化分期之间均无明显相关性,与肝组织内iNOS的表达亦无关,提示IFNAR的表达与肝脏病变程度无关,而肝组织内过度表达的iNOS及产生的NO也不影响CHB患者PBMCs IFNAR2的表达。