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目的:世界范围内胃癌是高发病高死亡率的癌症之一。中国是胃癌的高发地区,发病率高于世界平均水平。但关于胃癌发病机制的确切分子机制并未完全阐明。最近的研究表明:一类非编码蛋白质RNA称为长链非编码RNA(Lnc RNA)参与包括癌症在内的许多人类疾病的发病。本研究从人类LncRNA表达谱芯片测定的结果中,筛选出Lnc RNA ADAMTS9-AS1作为研究的对象,深入的研究其在大量胃腺癌组织样本中表达水平;分析其与患者病理信息和免疫组化标志物的相关性;通过在胃腺癌细胞中抑制Lnc RNA ADAMTS9-AS1表达后,研究其表达下调后对胃腺癌细胞功能影响;通过生物信息学分析其可能的下游分子为ADAMTS9(A Disintegrin-like And Metalloproteinase with ThromboSpondin motifs9)即I型血小板结合蛋白基序解聚蛋白样金属蛋白酶9。接着,初步的研究LncRNAADAMTS9-AS1与ADAMTS9的相关性。本研究为进一步了解LncRNA ADAMTS9-AS1在癌症的发病机制中所起的作用奠定基础,同时为寻找胃腺癌诊断标志物和治疗靶点提供依据。方法:1、选取6位具有代表性的胃腺癌患者的癌组织与其配对的癌旁正常组织,运用人类LncRNA表达谱芯片V3.0技术检测胃腺癌癌组织与癌旁正常组织差异表达的LncRNAs,筛选出LncRNAADAMTS9-AS1作为研究的对象。2、运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术,在大量样本中,即132位胃腺癌癌组织与癌旁正常组织中,检测LncRNA ADAMTS9-AS1表达水平。验证其结果与芯片结果是否一致,进一步分析LncRNA ADAMTS9-AS1表达水平与患者临床病理参数信息及免疫组化标志物的相关性。3、运用siRNA敲减技术,使胃腺癌细胞中LncRNAADAMTS9-AS1的表达下调,同时运用CCK-8检测细胞增殖实验,平板克隆实验,Transwell小室迁移和侵袭实验,流式细胞术检测细胞凋亡实验,初步研究抑制LncRNA ADAMTS9-AS1表达后,对胃腺癌细胞生物学功能的影响。4、通过生物信息学分析Lnc RNA ADAMTS9-AS1可能的下游分子为ADAMTS9。运用qRT-PCR方法验证ADAMTS9在胃腺癌组织中的表达水平,并分析其与LncRNAADAMTS9-AS1表达水平的相关性。结果:1、芯片结果:胃腺癌LncRNAs表达谱芯片检测结果显示,在6位具有代表性的胃腺癌患者的癌组织与其配对的癌旁正常组织对比,LncRNA ADAMTS9-AS1表达上调;相对与胃黏膜正常组织,LncRNAADAMTS9-AS1在胃腺癌组织上调倍数4.92倍(P<0.05)。2、大量胃腺癌组织样本验证结果:运用qRT-PCR技术,在132位胃腺癌患者癌组织与配对的癌旁正常组织中检测LncRNA ADAMTS9-AS1表达水平,结果显示以配对正常组织为对照,LncRNA ADAMTS9-AS1表达上调,上调率为66%(87/132),平均上调倍数是6.26倍(P<0.05)。统计分析结果显示,LncRNA ADAMTS9-AS1的上调表达和和肿瘤的大小,肿瘤侵袭性,脉管侵袭,VEGF高表达相关。3、细胞功能实验结果:运用qRT-PCR技术,以正常的胃粘膜细胞株GES-1细胞为参照,LncRNAADAMTS9-AS在四株胃腺癌细胞株(BGC-823,SGC-7901,MGC-803,AGS细胞株)中均上调表达,上调倍数为8~19倍,P<0.05。我们选择其中两个胃腺癌细胞株,运用针对两个不同位点的siRNA敲减LncRNA ADAMTS9-AS1,抑制其表达(抑制率超过70%)后,发现细胞的增殖能力,克隆形成能力,迁移和侵袭能力受到明显的抑制,同时凋亡细胞明显增加(P<0.05)。4、下游分子初步探索结果:LncRNA ADAMTS9-AS1的正义链为转录ADAMTS9蛋白的基因,运用qRT-PCR技术在胃腺癌患者癌组织与癌旁正常组织中检测ADAMTS9的mRNA表达水平,发现在胃腺癌组织中ADAMTS9的mRNA表达下调。且ADAMTS9的下调表达和和肿瘤的大小,肿瘤侵袭性,VEGF表达相关。线性回归分析显示ADAMTS9与LncRNA ADAMTS9-AS1表达负相关,相关系数r=0.754,决定系数R2=0.568,P<0.05。以LncRNAADAMTS9-AS1的ΔCt为自变量,以mRNA ADAMTS9ΔCt为因变量,方程式为y=-0.337x+10.215。结论:本研究结果显示,在LncRNA表达谱芯片检测,大量胃腺癌组织样本验证,胃腺癌细胞验证结果均为LncRNA ADAMTS9-AS1在胃腺癌组织和细胞上调表达,三者结论一致。细胞功能实验结果显示,抑制LncRNA ADAMTS9-AS1表达同时也抑制了胃腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,同时凋亡细胞明显增加,因此LncRNA ADAMTS9-AS1表达上调可促进胃腺癌细胞的增殖和侵袭并抑制细胞凋亡。统计结果表明:LncRNAADAMTS9-AS1的上调表达和胃腺癌患者肿瘤的大小,肿瘤侵袭性,脉管侵袭,以及组织样本中VEGF高表达相关,同时发现LncRNAADAMTS9-AS1对应的正义链基因为ADAMTS9,ADAMTS9在胃腺癌中下调表达,并且和肿瘤的大小,脉管侵袭,VEGF表达相关。与二者的相关的临床病理因素和免疫组化标志物基本相同。线性回归分析发现LncRNA ADAMTS9-AS1和ADAMTS9的表达水平呈负相关。结合文献报道和实验结果,我们推测上调LncRNA ADAMTS9-AS1可能对ADAMTS9的表达起着负调控作用,LncRNA ADAMTS9-AS1通过下调ADAMTS9进而对ADAMTS9所涉及的信号转导通路的下游分子如VEGF等发挥调控作用,从而促进肿瘤的增殖和侵袭。