pSupper1300-EB1c-GFP重组质粒的构建及转基因植株的筛选

来源 :山西师范大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:wodeking2009
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所有的真核生物必须通过细胞分裂把亲本的遗传信息传递给下一代。这个过程涉及到微管骨架的重组,且微管动态性的增加协同细胞核核膜的破裂对微管骨架的形态建成非常重要。微管的动态性不仅与其内在的动态不稳定性有关,还由微管结合蛋白(MAPs)所调控。微管正末端追踪蛋白(+TIPs)是MAPs中能够识别聚合微管远末端的一类蛋白,是微管动态性的调控因子,微管末端结合蛋白1(EB1)是形成微管正末端复合物的核心,是微管动态性的主要调控因子。有丝分裂纺锤体定位和染色体的分离需要EB1的参与。EB1功能的缺失会导致中期细胞有丝分裂纺锤体结构产生缺陷。这种情况下染色体的分离是否异常还不清楚,并且EB1在通过调控纺锤体的运动诱导染色体分离中的机制也不完全清楚。韩等发现在UV-B的照射下小麦种子的根尖细胞中染色体会发生不正常的分裂,染色体会出现三束,四束,六束的现象。EB1在这个过程中是否会起作用还有待进一步验证。同时,增强UV-B辐射是否会使植物根细胞中微管的分布发生改变,且EB1在这个过程中是否起调控作用还有待进一步研究。  本研究根据Genbank上发表的EB1c的序列设计引物,剪取野生型拟南芥幼嫩叶片提总RNA,扩增EB1c,构建pUC19-EB1c克隆载体后,构建pSupper1300-EB1c-GFP表达载体,转入农杆菌后再侵染拟南芥并进行筛选。结果获得了pUC19-EB1c克隆载体和重组质粒pSupper1300-EB1c-GFP,序列测定后与Genbank中发表的EB1c序列进行比对,同源性是100%。转入农杆菌中,随后再浸染拟南芥植株,最后筛选获得T2代拟南芥植株。
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