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目的：通过构建人端粒酶逆转录酶中段(hTERT-m)、C-端(hTERT-c)蛋白原核表达系统,并分离提纯获得高纯度的hTERT-m和hTERT-c蛋白,以此两种蛋白为抗原利用间接ELISA技术检测癌症患者血清抗hTERT自身抗体水平,为血清抗hTERT自身抗体能否作为一项新的肿瘤标志物提供实验依据。 方法：1.质粒载体pMAL-c5X和重组质粒pMAL-p5X-hTERT-m、pMAL-p5X-hTERT-c经限制性内切酶BamHⅠ和NdeⅠ双酶切,琼脂糖凝胶电泳分离后,割胶回收获得带有相同粘性末端的质粒载体和目的基因,T4DNA连接酶16℃连接过夜;2.连接产物转化克隆菌株NEB10-β大肠杆菌感受态细胞,提取重组质粒进行酶切及测序验证;3.重组质粒pMAL-c5X-hTERT-m、pMAL-c5X-hTERT-c转化表达菌株TB1大肠杆菌感受态细胞,挑取单个菌落进行小培养,0.3mmol/LIPTG诱导目的蛋白表达,经12％SDS-PAGE初步验证目的蛋白是否表达;4.重组表达菌TB1扩大培养,0.3mmol/LIPTG诱导目的蛋白表达,运用直链淀粉树脂层析柱和BioLogicDuoFlow蛋白纯化仪分离提纯目的蛋白,经SDS-PAGE、Westernblot鉴定、考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质浓度。5.利用间接ELISA法检测135例癌症患者、96例良性疾病患者及135例正常对照组血清抗hTERT-m和抗hTERT-c自身抗体的水平,检测结果进行统计分析。 结果：①成功构建pMAL-c5X-hTERT-m-TB1、pMAL-c5X-hTERT-c-TB1原核表达系统,并能大量表达可溶性目的蛋白;②成功获得高纯度重组hTERT-m和hTERT-c蛋白,浓度分别为0.266mg/mL和1.0mg/mL;③间接ELISA法检测血清抗hTERT-m和抗hTERT-c自身抗体结果发现:正常对照组、良性疾病组和癌症组血清抗hTERT-m自身抗体测定OD值(X±s)分别为0.302±0.063、0.421±0.093和0.525±0.166,抗hTERT-c自身抗体测定OD值(X±s)分别为0.400±0.075、0.527±0.107和0.650±0.187;癌症组高于良性疾病组和健康对照组(P<0.001),良性疾病组高于正常对照组(P<0.001);肺癌、大肠癌、乳腺癌和卵巢癌患者血清抗hTERT自身抗体水平高于相应良性疾病患者血清,差异有统计学意义。 结论：癌症组患者血清抗hTERT-m和抗hTERT-c自身抗体水平显著高于良性疾病组患者和正常对照组,提示血清抗hTERT-m和抗hTERT-c自身抗体有可能成为一项新的肿瘤标志物。