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目的:观察博来霉素致小鼠肺纤维化病变中Smad7、泛素化Smad7、乙酰化Smad7及相关纤维化指标的表达变化,探讨Smad7泛素化修饰通过介导TGF-β1/Smads信号通路对肺纤维化的发生发展的影响及Smad7泛素化修饰与Smad7乙酰化修饰的相互关系,为寻找肺纤维化治疗靶点提供理论和实验依据。方法:选用体重18~20g的雄性C57小鼠30只。按数字表法随机分为空白组、博来霉素(Bleomycin,BLM)组、BLM+MG132(泛素化蛋白酶体抑制剂)组,各组10只。BLM组、BLM+MG132组采用一次性气管滴入博来霉素(5mg/kg)构建肺纤维化模型。BLM+MG132组小鼠于造模后第1天起给予MG132(0.1mg/kg)腹腔注射,每天1次,直至第28天。于造模28天后取小鼠肺脏待后续检测。小鼠左肺下叶制作病理切片,HE染色光镜下观察肺组织形态学改变,Masson染色观察胶原含量;羟脯氨酸含量测定评价肺纤维化程度;Westernblot检测Smad7、α-SMA、Col-I的蛋白水平;q RT-PCR检测各组Smad7、Col1a1(Col-I)、TGF-β1、α-SMA的m RNA表达变化;免疫沉淀(IP)Smad7蛋白,免疫印迹(IB)检测各组小鼠肺组织中Smad7泛素化水平、乙酰化水平。结果:1、在予博来霉素造模28天后,C57小鼠肺组织HE染色镜下显示可见肺泡腔狭窄、塌陷,肺泡间隔增厚,肺泡、气管周围血管见较多中性粒细胞、巨噬细胞浸润,肺组织正常结构已遭到破坏;Masson染色镜下可见大片染成蓝紫色胶原纤维分布在肺间质、肺泡间隔;BLM组小鼠肺组织羟脯氨酸较空白组含量增多;以上结果表明C57小鼠气管滴注博来霉素28天后肺纤维化模型构建成功。予MG132(BLM+MG132组小鼠)干预后,HE染色镜下见肺泡腔狭窄、肺泡间隔增厚、炎症细胞浸润等程度较BLM组减轻;Masson染色镜下见蓝紫色胶原纤维减少;同时肺组织羟脯氨酸的含量减少,提示肺纤维化程度减轻。2、予BLM处理后,与空白组小鼠比较,小鼠肺组织α-SMA、Col-I蛋白表达增多,Smad7蛋白表达减少,差异具有统计学意义(p<0.05);Col1a1、α-SMA、TGF-β1、Smad7 m RNA表达上调,差异具有统计学意义(p<0.05);Smad7泛素化水平增高、乙酰化水平下降。3、予MG132干预后,与BLM组小鼠比较,小鼠肺组织α-SMA、Col-I蛋白水平下降,Smad7蛋白水平上升,差异具有统计学意义(p<0.05);Col1a1、α-SMA、TGF-β1、Smad7 m RNA表达下调差异具有统计学意义(p<0.05);Smad7泛素化水平下降、乙酰化水平增高。结论:1博来霉素致小鼠肺纤维化中Smad7的蛋白表达减少,TGF-β1/Smads信号通路过度激活,促进了肺纤维化的发生发展。2 MG132能够抑制Smad7的泛素化水平,上升Smad7的乙酰化水平,上调Smad7的蛋白水平,增强Smad7对TGF-β1/Smads信号通路负向调控作用,减轻肺纤维化病变。Smad7的泛素化修饰与乙酰化修饰可能存在竞争关系。