枇杷叶是传统的止咳平喘中药,具有化痰止咳、和胃降逆之功效。我国是世界上最主要的枇杷生产国,栽培面积和产量占世界的2/3以上,主要分布在长江以南的各省。近年来的研究发现,枇杷叶中三萜酸类成分具有抗炎、降血糖、抗病毒以及抗癌的活性,其中熊果酸为主要的药用成分。本试验以提取过精油和水提物的枇杷叶为原料,探索从中提取分离熊果酸的新工艺,从而为枇杷叶的综合利用提供了参考。通过运用提取、溶解除杂、酸碱富集,大孔吸附树脂技术以及重结晶等分离纯化方法,得到纯度为95.10%的熊果酸产品。研究的主要内容如下:(1)确定反相高效液相法准确测定枇杷叶原料中熊果酸含量的最佳测定条件。试验通过对色谱柱的选择和流动相的调节,使得色谱峰基本完全分离,基线稳定,峰形好,建立了一种快速准确测定枇杷叶原料中熊果酸的分析方法。(2)考察溶剂回流提取时提取溶剂、提取时间、提取温度、料液比以及提取次数对提取枇杷叶原料中熊果酸的得率的影响。得到的最佳提取条件为提取溶剂:95%乙醇;提取时间:2 h;温度:80℃;料液比:1:14;提取次数:2次,在这个条件下,提取枇杷叶原料中熊果酸的得率可以达到1.150%。(3)研究水和石油醚除去乙醇提取物中杂质的工艺条件。实验结果表明,水用量为1:50,石油醚用量为1:60并且重复三次,能够较好的除去乙醇提取物中的水溶性和脂溶性杂质。通过乙醇的再次溶解,提取物中熊果酸的纯度达到14.41%,并且具有95.36%的回收率。(4)研究了酸碱法纯化富集熊果酸的工艺条件。最后确定的最佳富集条件为:以10%NaOH碱化提取液的pH=14,再以5%H2SO4酸化调节pH=3,用1倍样品溶液体积的pH=3的酸性水溶液稀释,得到的熊果酸产品的纯度和回收率分别为26.33%和88.10%。(5)选用非极性树脂XDA-200吸附分离富集溶液中的熊果酸。最后得出最佳工艺参数:吸附流速为1.5 BV/h,样品溶液浓度为3 mg/mL时吸附效率最高达到96.00%;优化后的洗脱剂组合以1 BV/h的洗脱流速洗脱,pH值为11的90%乙醇洗脱得到熊果酸,洗脱剂的用量为6 BV。三次结晶后熊果酸产品的纯度达到95.10%。此晶体经过熔点和旋光度的测定、薄层色谱、高效液相色谱、红外光谱以及质谱进行结构验证,并与熊果酸的标准品比较,可以确定其为熊果酸单体,纯度大于95%。整个工艺过程中熊果酸总的回收率为31.40%。(6)采用碘量法研究枇杷叶原料提取物的抗氧化作用。将不同阶段的提取物、抗氧化剂2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)和特丁基对苯二酚(TBHQ)添加到新鲜的猪油中,强制氧化并定时测定油样的过氧化值,最后得出结论:与BHT和TBHQ相比,枇杷叶原料提取物具有较弱的抗氧化作用。