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目的探讨利妥昔单抗和依鲁替尼单药以及两药联合在含有和不含有人补体条件下对弥漫性大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)细胞株Farage的增殖和凋亡作用及其作用的可能机制。方法1.分别在含有和不含有人补体的条件下,采用CCK-8法检测不同浓度利妥昔单抗和依鲁替尼及两药联合对Farage细胞的增殖抑制率。2.采用流式细胞术检测利妥昔单抗在含有和不含有人补体的条件下对Farage细胞的凋亡率;采用流式细胞术检测依鲁替尼在含有人补体的条件下对Farage细胞的凋亡率,采用实时荧光定量PCR(Real Time PCR,RT-PCR)检测Survivin、Fas、Caspase-8、Caspase-3 mRNA表达水平,采用Western Blot检测Survivin、Caspase-3蛋白的表达水平。3.在含有人补体的条件下,采用流式细胞术检测利妥昔单抗联合依鲁替尼对Farage细胞的凋亡率,采用Western Blot法检测Survivin、Caspase-3蛋白表达变化。结果1.单药利妥昔单抗在不含有人补体的条件下(直接效应),不同药物浓度的利妥昔单抗对Farage细胞增殖抑制率和凋亡率的差异无统计学意义,P>0.05;在含有人补体的条件下(补体依赖性细胞毒效应),对Farage细胞增殖抑制作用显著,呈浓度和时间依赖性,在含有和不含有补体的培养条件下的增殖抑制率差异有统计学意义,P<0.05,1mg/ml利妥昔单抗作用Farage细胞24 h后的早期凋亡率(4.81±0.91)%高于对照组(0.22±0.02)%,晚期凋亡率(16.92±1.74)%高于对照组(2.01±0.21)%,差异均有统计学意义,P<0.05。2.单药依鲁替尼对Farage细胞有明显增殖抑制作用,呈浓度和时间依赖性,在含有和不含有人补体条件下的增殖抑制率差异无统计学意义,P>0.05;10mmol/L依鲁替尼作用Farage细胞24 h后的早期凋亡率(5.49±0.42)%高于对照组(0.21±0.02)%,P<0.05,晚期凋亡率(11.95±1.80)%高于对照组(2.01±0.21)%,差异均有统计学意义,P<0.05。3.在不含有人补体的条件下,25mg/ml、50mg/ml、100mg/ml利妥昔单抗分别联合2.5mmol/L、5mmol/L、10mmol/L依鲁替尼同时作用Farage细胞48 h后的增殖抑制率与利妥昔单抗单药的差异有统计学意义,P<0.05,与依鲁替尼单药组的差异无统计学意义,P>0.05。4.在含有人补体的条件下,0.25mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml利妥昔单抗分别联合2.5mmol/L、5mmol/L、10mmol/L依鲁替尼同时作用Farage细胞48 h后,两药联合的抑制率高于利妥昔单抗单药和依鲁替尼单药,差异均有统计学意义,P<0.05;1mg/ml利妥昔单抗联合10mmol/L依鲁替尼同时作用Farage细胞24 h后,联合组的总凋亡率(44.3±2.20)%高于利妥昔单抗单药组(21.73±2.01)%和依鲁替尼单药组(17.44±1.60)%,;联合组的早期凋亡率(8.51±0.70)%高于利妥昔单抗单药组(2.81±0.40)%和依鲁替尼单药组(5.49±0.50)%;联合组的晚期凋亡率(35.82±2.10)%高于利妥昔单抗单药组(18.92±1.81)%和依鲁替尼单药组(11.95±1.02)%,差异均有统计学意义,P<0.05。5.10mmol/L的依鲁替尼在含有人补体的条件下,作用Farage细胞12h后,Survivin mRNA相对表达量(0.55±0.11)低于对照组(1.00±0.00),Fas(1.63±0.15)、Caspase-8(1.90±0.20)、Caspase-3(2.20±0.20)mRNA相对表达量均高于对照组(1.00±0.00),差异均有统计学意义,P<0.05;10mmol/L、15mmol/L的依鲁替尼作用Farage细胞12 h后,15mmol/L浓度组的Survivin蛋白表达量(0.410±0.052)低于10mmol/L浓度组(0.611±0.018),且两组均低于对照组(0.848±0.023),差异有统计学意义,P<0.05,15mmol/L浓度组的Caspase-3蛋白表达量(0.949±0.046)高于10mmol/L浓度组(0.664±0.049),且两组均高于对照组(0.365±0.007),差异有统计学意义,P<0.05。6.1mg/ml利妥昔单抗联合10mmol/L依鲁替尼在含有人补体的条件下,同时作用Farage细胞12 h后,联合组的Survivin蛋白表达量(0.416±0.012)低于利妥昔单抗单药组(0.853±0.086)和依鲁替尼单药组(0.657±0.019),差异有统计学意义,P<0.05,联合组的Caspase-3蛋白表达量(0.881±0.078)高于依鲁替尼单药组(0.683±0.014)和利妥昔单抗单药组(0.328±0.015),差异有统计学意义,P<0.05。结论1.利妥昔单抗能通过补体依赖性细胞毒(complement dependent cytotoxicity,CDC)作用杀伤Farage细胞,抑制Farage细胞增殖。2.依鲁替尼能够抑制Farage细胞增殖,促进细胞凋亡,可能与下调Survivin的表达,上调Fas、Caspase-8、Caspase-3的表达有关,其作用与补体无关。3.在补体存在的条件下(具有CDC效应),利妥昔单抗联合依鲁替尼能增强对Farage细胞增殖抑制和促进细胞凋亡的作用,其机制可能与下调Survivin并上调Caspase-3蛋白表达有关。