选择性COX-2抑制剂尼美舒利对人胰腺癌PANC-1细胞生长及凋亡作用的实验研究

来源 :广西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhongqiangcumt
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目的:观察尼美舒利(nimesulide, NIM)对体外培养的人胰腺癌PANC-1细胞生长、凋亡及细胞周期分布的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法:以不同浓度的尼美舒利的作用于体外培养人胰腺癌PANC-1细胞,采用MTT比色法观察生长增殖情况,倒置光学显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期,分光光度法检测Caspase-3活性,免疫细胞化学检测Cox-2、Caspase-3、和Survivin蛋白的表达变化。结果:浓度为50μmol/L的尼美舒利作用于人胰腺癌PANC-1细胞24h即可观察到对细胞生长的抑制作用,抑制率为3.80%,当浓度为400μmol/L作用72h时,抑制率可达到71.83%,随药物浓度增大和作用时间增加,抑制率不断增大。同时,细胞形态学观察显示,尼美舒利可使PANC-1细胞贴壁能力明显减弱,胞浆变浑浊,生长状态变差。(50、100、200、400μmol/L)尼美舒利分别作用于胰腺癌PANC-1细胞48h后,AnnexinV/PI双染色分析结果显示,PANC-1细胞凋亡率分别为(12.94±2.11)%、(23.38±2.92)%、(36.63±1.33)%和(53.28±3.31)%,与对照组(1.79±0.53)%比较,差异有统计学意义(P<0.05);细胞周期分析结果显示,G0/G1期的比例分别为(43.74±2.14)%、(48.74±2.63)%、(55.78±2.99)%和(58.69±3.71)%,与对照组(40.38±1.04)%比较,差异有统计学意义(P<0.05),并相应地使S期和G2/M期比例下降;Caspase-3相对活性分别为0.0963±0.0049、0.1420±0.0063、0.2394±0.0126和0.2519±0.0241,与对照组(0.0554±0.0048)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化结果显示,200μmo1/L尼美舒利作用于胰腺癌PANC-1细胞48h后,Cox-2阳性细胞率由(72.32±2.16)%下降到(37.21±3.56)%,差异有统计学意义(P<0.05);Caspase-3阳性细胞率由(11.21±1.16)%上升到(56.68±2.29)%,差异有统计学意义(P<0.05);survivin阳性细胞率由(61.564-3.45)%下降到(34.15±2.86)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.尼美舒利在体外可明显抑制人胰腺癌PANC-1细胞的生长,在一定范围内呈时间、剂量依赖性。2.尼美舒利在体外可以诱导人胰腺癌PANC-1细胞凋亡,随着药物浓度的增大,凋亡率逐渐升高。3.尼美舒利可改变人胰腺癌PANC-1细胞的细胞周期分布,表现为明显的G0/G1期阻滞。4.尼美舒利可提高人胰腺癌PANC-1细胞中Caspase-3的表达和活性,激活Caspase-3可能是尼美舒利诱导PANC-1细胞凋亡的机制之一5.尼美舒利可下调人胰腺癌PANC-1细胞中Survivin、Cox-2蛋白的表达,通过下调Survivin蛋白的表达,解除了对Caspase-3的抑制,使其活性增高,这可能是尼美舒利诱导细胞凋亡的另一机制。
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