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乙肝病毒为有包膜的DNA病毒,其包膜蛋白由HBV基因组的S基因区编码.该基因区可分为preS1基因、preS2基因和S基因三个部分,分别编码108~119个氨基酸的preS1蛋白、55个氨基酸的preS2蛋白和226个氨基酸的S蛋白.为开展preS1蛋白生物功能研究和开发preS1抗原-抗体诊断试剂,该文进行了以下研究:1.根据HBV preS1基因的已知序列(GenBank AB033550)与密码子简并原则,选择毕赤酵母(Pichia pastoris)高频使用密码子替代preS1基因序列中毕赤酵母低频使用密码子.该文对preS1基因序列119个密码子中的81个密码子进行了替换,涉及16种不同的氨基酸.2.将合成的preS1基因亚克隆入毕赤酵母高效分泌表达载体pPICZαA中多克隆位点上游的α-因子信号肽序列和下游myc检测标签及6×His纯化标签序列对框完全正确.应用电穿孔法(electroporation)将线性化重组分泌表达质粒pPICZα-S1转入宿主Pichia pastoris SMD1168感受态细胞中,经高浓度Zeocin(1000ug/ml)筛选,获得preS1基因多拷贝整合酵母工程菌Pichia pastoris SMD1168-S1.经0.5﹪甲醇诱导,实现了preS1蛋白的分泌型表达,Pichia pastoris SMD1168-S1培养上清经SDS-PAGE及酶联免疫分析表明表达产物为preS1蛋白,相对分子量为16×10<3>,薄层层析扫描结果显示表达的目的蛋白上上清总蛋白46﹪.