【摘 要】
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目的:扩增日本血吸虫新基因Sj Dna J-类似蛋白基因;构建pWR450-1/Sj Dna J-类似蛋白基因原核表达载体并进行表达;构建pcDNA3.1(+)/Sj Dna J-类似蛋白核酸疫苗,初步研究该核酸
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目的:扩增日本血吸虫新基因Sj Dna J-类似蛋白基因;构建pWR450-1/Sj Dna J-类似蛋白基因原核表达载体并进行表达;构建pcDNA3.1(+)/Sj Dna J-类似蛋白核酸疫苗,初步研究该核酸疫苗对BALB/c小鼠诱导的免疫保护性作用。 方法:根据新基因的生物信息学分析结果,选择Sj Dna J-类似蛋白作为研究对象,用PRIMER5.0引物设计软件设计引物并合成,PCR扩增Sj Dna J-类似蛋白基因,将PCR产物纯化后与pUCm-T载体连接,经蓝白筛选、双酶切和PCR鉴定后,亚克隆入pWR450-1原核表达载体及pcDNA3.1(+)真核表达载体中,经抗生素(氨苄)筛选、双酶切鉴定、PCR鉴定及测序鉴定后,将构建的pWR450.1/Sj Dna J-类似蛋白基因重组体于大肠埃希菌中以IPTG诱导表达,SDS-PAGE及Western blotting鉴定表达情况;构建的pcDNA3.1(+)/Sj Dna J-类似蛋白基因重组质粒经大量扩增后,注射到BALB/c小鼠后腿股四头肌肌肉组织中,每2周免疫一次,共免疫3次,末次免疫后2周,用日本血吸虫尾蚴感染BALB/c免疫小鼠,42天后剖杀,计算肝脏虫卵以及成虫数,并用PCR、免疫组化法、ELISA等方法对Sj Dna J-类似蛋白基因在小鼠体内的表达、稳定性以及对小鼠的保护性作用等进行研究。 结果:构建了pWR450.1/Sj Dna J-类似蛋白基因重组原核表达载体,并在大肠埃希菌TG1中经IPTG诱导后表达。构建了pcDNA3.1(+)/Sj Dna J-类似蛋白基因真核表达重组体,免疫BALB/c小鼠后,提取重组质粒组小鼠后腿股四头肌的总DNA,PCR扩增在一定时期内能检测到Sj Dna J-类似蛋白基因;免疫组化实验显示Sj Dna J-类似蛋白基因可在免疫小鼠肌肉中表达;末次免疫14天后,重组质粒组小鼠血
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