菌血症及肠道感染是临床常见的感染性疾病。其涉及的病原菌范围广泛,种类繁多。在患者自身免疫力降低,或者得不到及时正确处理时,病情加剧可发展为败血症伴发休克症状。因此,快速准确地鉴定细菌对指导临床治疗十分重要。而常规的病原学诊断方法包括标本中细菌培养、分离及生化反应鉴定,所需时间长,难以及时指导疾病的治疗。基因芯片技术的发展对于医学微生物学及感染性疾病的诊治而言意义深远,是查明感染性疾病病原体的强有力工具。本课题研究目的是为了建立一种适合在普通临床诊断实验室开展的高效、简单、成本较低的病原菌高通量芯片检测分析系统。以往应用16S rRNA基因检测细菌较多,近年来的研究表明核糖体大亚基RNA(23S rRNA)基因序列在种水平比16S rRNA基因具有更多的可变位点,分辨率高。故我们以23S rRNA基因为靶分子建立菌血症常见病原菌悬浮芯片检测分析系统。研究结果显示,此靶分子不足以区分鉴定某些肠杆菌科细菌,因此选择蛋白编码基因gyrB分析肠道感染病原菌。为了明确gyrB基因对于肠道感染常见的肠杆菌科与弧菌科细菌是否具有良好的区分鉴别能力,我们对所获得的临床分离株gyrB基因序列进行了详细的系统发育分析,为研发基于gyrB基因的肠道感染常见病原菌悬浮芯片检测系统提供客观依据。 第一部分 菌血症常见病原菌悬浮芯片高通量检测研究 基因芯片检测细菌时,先使用通用引物实现对不同细菌相对保守的DNA区域的普遍扩增,然后PCR扩增产物与芯片上的探针发生杂交反应,各种PCR产物依其序列与探针