猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种严重危害养猪业的传染病,主要引起妊娠母猪流产、死胎、木乃伊胎、弱仔等繁殖障碍以及仔猪的呼吸系统疾病。2014年底,PRRSV NADC30-like毒株在我国大规模流行,其Nsp2区域与HP-PRRSV毒株的Nsp2区域缺失不同,存在多个氨基酸的不连续缺失。此次疫情给我国养猪业造成了巨大的经济损失。流行病学调查发现,2014年后我国HP-PRRSV的阳性率逐年下降,而NADC30-like毒株的阳性率逐年升高,我国PRRSV流行毒株逐渐由HP-PRRSV毒株向NADC30-like毒株转变。本研究本着以防控该病并进一步进行亚型的鉴别诊断为目的,以PRRSV NADC30-like QHD1毒株的Nsp2为研究对象,开展了针对Nsp2单克隆抗体制备的相关研究。主要研究内容包括:1.PRRSV Nsp2蛋白单克隆抗体的制备在本实验室已分离到的QHD1毒株的基础上,通过设计特异性引物扩增Nsp2基因,利用原核表达系统构建重组质粒pET-32a(+)-Nsp2,以此为抗原免疫Balb/c小鼠,经血清效价检测分析,进行常规细胞融合,通过间接ELISA、IFA和Western Blot三种方法对细胞集落进行筛选,亚克隆后,最终获得了两株抗NADC30-like Nsp2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为9C2和9C8,抗体亚型鉴定均属于lgG1型。2.间接ELISA方法的建立以重组蛋白为包被抗原,从抗原最佳包被浓度、包被时间、底物作用时间、特异性检验等方面进行研究,建立了间接Nsp2-ELISA方法。该方法重复性好、灵敏度高、特异性强、方便快捷,从而为临床上抗PRRSV NADC30-like毒株的抗体诊断提供了技术支持和检测的便利。