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口蹄疫是多种偶蹄动物（包括家畜和野生动物）的高度接触性病毒传染病，被国际兽疫局列为A类传染病之首，其感染动物后的主要危害是使家畜生产力下降和种畜经济价值丧失，对畜产品出口贸易造成严重影响。我们根据已有资料推测，3A基因可能是口蹄疫病毒的毒力决定簇，它具有高度保守性，其变异和部分缺失对病毒在牛体内的致弱和宿主嗜性发生改变起重要作用。 本论文利用大肠杆菌原核表达系统，通过基因重组技术高效表达重组3A蛋白，为进一步研究3A蛋白的结构差异与病毒毒力、宿主嗜性等方面的相关作用打下基础，为FMDV多肽疫苗和基因疫苗的研制开发提供一些可借鉴的资料。 本实验应用分子生物学技术，构建含FMDV 3A基因的重组原核表达载体pProEX-3A2-3和pProEX-3A4-4。实验中，提取口蹄疫病毒RNA，利用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）克隆FMDV 3A基因，纯化后与载体相连，转化感受态细胞，筛选鉴定后提取质粒测定其序列。RT-PCR结果表明，扩增出符合预期分子量大小的DNA片段，经测序确定为FMDV 3A。序列分析后选取2株差异毒株进行大肠杆菌原核表达。利用聚合酶链式反应（PCR）在3A基因的两端引入BamH Ⅰ和XbaⅠ酶切位点。将3A基因克隆到用同样限制酶线形化的原核表达载体pProEX-HTb中，转化大肠杆菌BL21，经氨苄抗性筛选得到阳性克隆，命名为pProEX-3A2-3和pProEX-3A4-4，IPTG诱导表达。SDS-PAGE和Western bolt结果证实，大肠杆菌菌体不可溶性蛋白中富含3A蛋白，且此融合蛋白的分子量符合预期设计，说明3A蛋白在表达产物中以包涵体的形式存在，所表达的蛋白含量分别占菌体蛋白的29.2％和22.1％。