MAP30（Momordica anti-HIV protein of 30 kD）是从苦瓜中分离得到的一种分子量为30 kD的单链、Ⅰ型核糖体失活蛋白。研究表明,MAP30具有抗病毒活性,对急性和慢性病毒感染都非常有效。此外,它还具有抗肿瘤、使病毒DNA拓扑失活、抑制病毒整合酶、核糖体失活以及抗菌等多种生物活性。而且,MAP30的作用具有良好的特异性,只对病毒感染的细胞或肿瘤转化细胞有效,但对人正常细胞无细胞毒性。MAP30这些显著的作用特点,使其有可能发展成为抗病毒、抗肿瘤治疗中最有前景的候选药物。 本研究通过PCR技术,从苦瓜总DNA中扩增出编码MAP30成熟蛋白的基因,经过测序证明完全正确后亚克隆到原核表达载体pET-30a中,构建成带有N-端6His-tag的融合表达载体。表达载体用CaCl₂介导的化学转化法转化大肠杆菌感受态细胞BL21（DE3）,然后利用PCR筛选阳性克隆。工程菌经1mmol/L IPTG诱导4h实现表达,而且在30℃时融合蛋白表达量最高,约占菌体总蛋白的56%。该融合蛋白在大肠杆菌中主要以可溶的形式存在。通过镍鏊合亲和层析进行一步纯化,纯化蛋白占上清总蛋白的37.2%,发酵液产率为250 mg/L。Western blot分析表明,重组蛋白具有免疫原性,可与兔抗His-tag多克隆抗体发生特异性反应。利用MTT法分析重组MAP30的细胞毒性,结果表明其对小鼠3T3和S-180肿瘤细胞株具有明显的抑制作用,抑制效果呈剂量依赖关系,ID₅₀分别约为50 μg/ml和3.0mg/ml,但对人正常胚肺二倍体WI-38细胞株的毒性极小。 通过大肠杆菌制备的重组MAP30具有很好的抗肿瘤活性,这为继续研究其抗病毒功能,以及开展重组MAP30的中试研究,并最终将其开发成新型抗病毒、抗肿瘤基因工程药物奠定了良好的基础。