背景:在中枢神经系统(central neural system,CNS)中,β淀粉样蛋白(betaamyloid,Aβ)降解和清除的主要场所在小胶质细胞,由于小胶质细胞的免疫吞噬作用,使得CNS中的Aβ能维持在稳定生理水平,发挥其神经营养和突触传递信号分子的作用。Aβ是阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)最重要的病理学改变之一,当Aβ的产生和代谢发生异常时,就会引起AD样病变。在AD的大脑中,长期暴露在Aβ的环境下,小胶质细胞在疾病的作用下发生了免疫修饰,使得其由早期的激活转变成了过度激活,过度激活的小胶质细胞引发更严重的神经炎症反应和退行性病变。退行性病变的小胶质细胞表面分子表达异常,吞噬能力下降,与Aβ沉积形成了一个恶性循环。FcγRIIB作为FcγRs受体家族唯一免疫抑制分子,一方面经受体酪氨酸抑制基序(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif,ITIM)去磷酸化平衡兴奋性受体所引起的促进吞噬、释放炎性介质的作用,另一方面非ITIM依赖通路引起的凋亡效应。已有报道证实FcγRIIB作为寡聚体Aβ的受体,介导了Aβ对神经细胞的损伤作用;在外周巨噬细胞中条件性过表达FcγRIIB受体与细胞吞噬和趋化能力降低呈正相关。作为FcγRIIB丰富表达的小胶质细胞,FcγRIIB对小胶质细胞的功能尚无任何文献报道。本研究立足于在CNS中FcγRIIB新的功能与外周免疫系统经典作用,利用过表达FcγRIIB分子的质粒为载体转染小胶质细胞并暴露在Aβ环境中,来研究FcγRIIB对小胶质细胞的作用。目的:探讨不同形式的Aβ对小胶质细胞的作用,研究FcγRIIB所引起的神经细胞凋亡效应能否在小胶质细胞中以细胞毒性作用的表型出现。方法:采用CCK8法分别测定寡聚体Aβ和聚集体Aβ在不同浓度下对传代小胶质细胞的毒性作用,选择对细胞毒性低剂量的浓度作为给药依据;BV-2细胞给予Aβ处理检测Fc家族m RA的表达来确定FcγRIIB与Aβ相互作用的特异性;用不同形式的Aβ进一步孵育BV-2 36h,在蛋白水平上检测FcγRIIB的表达,来确认寡聚体Aβ与FcγRIIB的作用特性;优化寡聚体作用的时间点,选择更精密的时间点观察Aβ作用下蛋白表达;依据FcγRIIB蛋白表达水平的高峰,在传代小胶质细胞和原代细胞细胞上给药处理,通过FcγRIIB受体免疫荧光确定FcγRIIB受体表达和胞内定位特点;在非吞噬的传代神经细胞N2a中FcγRIIB表达高峰时间点之外观察Aβ对FcγRIIB的作用来佐证Aβ和FcγRIIB的相互作用;在BV-2中瞬时转染FcγRIIB质粒及相应的空载质粒,给予低剂量浓度的Aβ,来检测线粒体凋亡信号通路的caspase 12,caspase 3,PARP(Poly(ADP-ribose)polymerase-1)的表达和活性剪切,并用TUNEL试剂盒来统计凋亡细胞的个数;在BV-2中瞬时转染FcγRIIB质粒及相应的空载质粒,给予低剂量浓度的Aβ,来检测MARK(mitogen-activated protein kinase)信号通路下的JNK(c-Jun N-terminal kinases)和ERK(extracellular signal-regulated kinases)的激活情况;在BV-2中瞬时转染FcγRIIB质粒及相应的空载质粒,给予低剂量浓度的Aβ,通过免疫荧光染CD68(cluster of differentiation 68)分子,粗略观察FcγRIIB在Aβ刺激下的激活和吞噬效应,为之后经一步的形态学和功能学检测提供依据。结果:寡聚体和聚集体Aβ在低浓度时对细胞毒性差别不大,在高浓度时表现显著性差异,寡聚体Aβ比聚集体Aβ更毒;BV-2细胞给予Aβ处理后FcγRIIB的水平升高;不同形式的Aβ在36h时间梯度孵育BV-2时,聚集体和纤维状的Aβ能时间依赖性地下调FcγRIIB的蛋白表达水平,而寡聚体Aβ在12h蛋白表达上升,之后缓慢下降;在寡聚体的刺激下,FcγRIIB的蛋白表达水平在12h之前的时间点缓慢上升,在12h达到峰值,BV-2和原代小胶质细胞在该时间的的表达与蛋白免疫印记结果一致,在原代小胶质细胞还能看到FcγRIIB在核周围聚集增多;非吞噬细胞N2a中FcγRIIB的升高的保留时间比BV-2靠后;在BV-2中给低剂量毒性的Aβ,过表达FcγRIIB能敏化Aβ引起的细胞凋亡作用,caspase 3,caspase 12,PARP表达水平和Tunel阳性细胞个数均上升,而该浓度下,Aβ不会引起明显的凋亡效应;过表达FcγRIIB能介导Aβ在JNK通路所引起的神经损伤作用;过表达FcγRIIB受体能诱发溶酶体糖蛋白CD68的表达上升。结论:FcγRIIB过表达介导寡聚体Aβ对小胶质细胞的活化,导致小胶质细胞的凋亡,其机制涉及JNK的激活和内质网应激。