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目的:肿瘤细胞多药耐药性(multidrug resistance,MDR)的产生是肿瘤化疗中经常遇到的现象,也是导致化疗失败的一个主要原因。P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)介导的MDR在肿瘤MDR机制中处于主导地位。p-gp是一种ATP依赖性转运排出泵,通过ATP提供能量将已进入细胞内的药物从细胞内泵出细胞外,使肿瘤细胞内药物浓度降低。目前,通过特异性抑制mdr 1基因转录,最终达到抑制p-gp合成、逆转肿瘤MDR是该研究领域的热点。本研究主要使用反义寡核苷酸和反义核酶两种反义技术探讨在体外细胞水平反义基因治疗逆转肿瘤MDR的效果。 反义寡核苷酸(antisense oligonucleatide,ASODN)是一段几十个碱基的DNA片段,可以通过碱基互补与特定基因或mRNA结合,抑制该基因的表达和翻译。本研究将探讨封闭mdr 1基因上游多个转录激活位点和主要功能区对肿瘤细胞MDR的逆转作用,筛选逆转肿瘤MDR的最佳ASODN片断并探讨ASODN转染肿瘤细胞逆转MDR的理想作用浓度和转染后出现最大逆转效果的时段。 核酶也称酶性核酸,它是细胞内一段具有核酸酶活性的RNA,可降解mRNA。人工合成针对特定mRNA的核酶并导入细胞是治疗肿瘤的一种新途径。核酶可根据碱基互补的原则与目的RNA互补结合,并在其3′-侧剪切,实现特异性降解目的RNA的作用。分解产物脱离后,它可再次与其他目的RNA结合继续进行剪切。针对mdr-1设计抗mdr-1的核酶表达质粒,转染细胞后,其表达的核酶与mdr-1mRNA特异性结合并使之降解,P-gp的合成也随之停止,从而达到逆转肿瘤MDR的目的。本研究国内首次使用RNA结构分析程序进行核酶切割靶点选择,构建核酶表达质粒并观察其对肿瘤MDR的稳定逆转效果。 方法:1.设计互补于mdr-1的4个转录激活部位——主要转录激活部位(major initiation start zone,MA区)、次要转录激活部位(minor initiation Start