蒺藜苜蓿MtHb2基因在植物逆境胁迫及激素应答中的功能研究

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:peterwei2009
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本研究以蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)为材料,利用RT-PCR的方法从蒺藜苜蓿中分离得到一个受低温胁迫诱导表达的HD-Zip家族的基因,命名为MtHb2(Medicago truncatula homeobox2),构建超表达载体转化苜蓿和拟南芥,利用转基因拟南芥对该基因的功能进行了分析。主要实验结果如下:   1.MtHb2基因属于FID-Zip家族第二亚类,编码一个含270个氨基酸的蛋白。进化树分析显示MtHb2蛋白与HAT9、HAT22亲缘关系较近。   2.构建pGBKT7-MtHb2载体,在酵母AH109中证实MtHb2不具有转录激活功能。3.构建pCM1205-MtHb2-GFP载体,瞬时转化烟草后在激光共聚焦扫描显微镜下观察。结果显示pCM1205-MtHb2-GFP定位于烟草细胞的细胞核中。   4.MtHb2的表达受低温、干旱、高盐及生长素(IAA)的诱导,在叶片和果荚中表达量较高。   5.萌发实验、根伸长实验和存活率实验结果表明,与野生型相比,超表达MtHb2的拟南芥对ABA敏感性下降,而对低温、干旱和盐胁迫的敏感性增强。   6.低温、高盐和干旱胁迫处理后,转基因植株中脯氨酸合成基因的表达量低于野生型,而脯氨酸脱氢酶基因的表达高于野生型。   7.逆境胁迫下,转基因拟南芥的脯氨酸和可溶性糖的含量明显低于野生型。转基因拟南芥MDA和H2O2含量显著高于野生型拟南芥,膜伤害程度更严重。   8.超表达MtHb2降低了转基因植株叶片生长素含量,导致叶片发育异常;增强了对NAA的敏感性。   9.在温度、光强、光周期及水分状况相同的条件下,无论是春化还是未春化条件下,转基因拟南芥开花时间都明显晚于野生型。
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