葡萄籽原花青素对兔动脉粥样硬化的预防干预及分子机理研究

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目的:通过饲喂高胆固醇建立兔AS动物模型,观察GSPE对AS的预防作用,并从以下几方面探讨其作用机制:(1)研究GSPE对血脂的影响;(2)通过观察GSPE对氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)的影响,研究其抗脂质过氧化作用;(3)通过观察GSPE对C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)的影响,研究其抗内皮炎症作用;(4)通过观察GSPE对细胞间黏附分子(jntercellularadhesion molecule,ICAM-1)、血管细胞黏附分子(vascular cell adhesionmolecuIe,VCAM-1)、E-选择素的影响,研究其抗内皮粘附作用.方法:1、建立AS动物模型并进行GSPE预防干预选购雄性新西兰大白兔30只,分笼喂养,饮水不限,饲料量为每只每天100~120g,适应性喂养1周后进入实验.将其随机分为正常对照(A)、高脂模型(B)、GSPE预防干预(C)3组,每组1 0只,分别饲喂标准、标准+1%胆固醇、标准+1%胆固醇+1%GSPE的颗粒饲料.各组兔分别于实验开始前1天及开始后第1、2、4、8周末,在清晨空腹称重后,经耳中动脉采血.于实验的第12周末,各组兔全部在清晨空腹称重后,经耳中动脉采血后处死,留取主动脉、心、脑、肾组织进行形态学观察和免疫组织化学检查.2、血清学研究取上述3组兔的空腹血清标本,应用日立71 70型全自动生化分析仪测定其血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(loWdensity lipoprotein cholesterol,LDL-C)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)含量;应用酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)双抗体夹心法测定血浆ox-LDL含量;应用比色法测定血清MDA含量;应用酶免疫测定(enzyme immunoassay,EIA)法测定CRP含量;应用ELISA双抗体夹心法测定IL-6、ICAM-1、VCAM-1、E-选择素含量.3、病理学研究取上述3组兔的主动脉、心、脑、肾组织标本进行病理组织切片,应用光镜和透射电镜观察主动脉、心、脑、肾组织标本病理改变并拍照,并应用CD68和α-actin免疫组织化学染色观察主动脉血管内膜斑块的形成及纤维帽的结构等病理改变并拍照.结论:GSPE具有预防AS的作用,该作用的发挥与其能调节血脂、抗LDL氧化修饰、降低CRP水平、拮抗内皮炎症、抗内皮粘附作用有关.因此GSPE可以作为AS的预防干预候选药物,具有很好的开发应用前景.
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