目的证实Id-1基因和Id-1蛋白在喉癌组织和喉癌细胞系中的表达,并对其表达情况和肿瘤的分期及恶性程度的相关性进行研究。分化抑制因子(Id-1)又称DNA结合抑制因子,属于螺旋-环-螺旋(HLH)转录因子家族,成员之一,具有抑制细胞分化,促进细胞增殖的作用,他们可与一类具有bHLH结构的转录因子结合形成无功能的异源二聚体,从而抑制下游一些包含有E-box(CANNTG)或E样序列的靶基因的转录,发挥其显性负性调节功能。目前发现在哺乳动物中有Id-1、Id-2、Id-3、Id-4这4种蛋白,4个基因定位于不同的染色体,其表达和功能各不相同,文献报道在很多肿瘤细胞中常过表达,并与肿瘤的发生、侵袭、肿瘤血管的生成等方面密切相关。有报道称Id蛋白也可能作为判断肿瘤恶性程度一个新指标,为肿瘤靶向治疗提供一个新的靶点,但其在喉癌中的表达情况及其与喉癌分期的相关性的研究一直未见报道。方法(1)收集标本30例喉癌组织和10例正常组织均来自第四军医大学西京医院和唐都医院2007年10月至2008年4月所收的手术病例,培养Hep-2喉癌细胞株细胞,提取Hep2细胞系和各组织标本的cDNA。根据genbank上的Id-1基因序列设计引物,通过反转录PCR(RT-PCR)对30例喉癌组织,10例癌旁正常组织和一个喉癌细胞株在基因上对Id-1基因的表达进行检测。(2)通过蛋白质印迹杂交法(Western blot法)对喉癌组织、癌旁正常组织和喉癌细胞株在蛋白水平进行检测。(3)通过计算机量化对正常组织和各期喉癌组织的Id-1蛋白的表达差异性进行分析,并对不同的分期的喉癌组织及ⅢⅣ期的表达同Ⅰ期和Ⅱ期的表达差异性进行分析。(4)通过免疫组化分析正常组织和不同分化的喉癌组织Id-1蛋白表达差异性进行分析。结果(1)通过反转录PCR(RT-PCR),将扩增的基因片断跑胶,在紫外灯下观察,并拍照,喉癌组织和喉癌细胞株中Id-1基因PCR结果中有明亮的和所预期的Id-1基因片段大小相同的条带,而正常喉组织的产物中没有相对应的条带,经测序证实和genbank上的序列相同。说明喉癌组织和喉癌细胞株中Id-1基因高表达,而正常喉组织中没有Id-1的表达。(2)免疫组化和免疫印迹显示:喉癌组织和喉癌细胞株中Id-1蛋白高表达,而正常喉组织中没有Id-1蛋白表达。(3)Id-1蛋白的表达与喉癌组织的临床分期、分化程度具有正相关性(P<0.05)。结论(1)Id-1基因在喉癌组织和喉癌细胞株中高表达,而在正常喉组织中不表达。(2)Id-1蛋白在喉癌组织和喉癌细胞株中高表达,而在正常喉组织中不表达。(3)Id-1蛋白的表达与喉癌的发生、发展及临床分期有相关性,有可能作为对喉癌的预后进行评估指标之一,可望成为研究喉癌基因治疗的一个新的靶点。