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第一部分诱骗受体3(Dc R3)在胰腺癌中的表达及临床意义目的研究诱骗受体3(Dc R3)在胰腺癌中的表达,并探讨其临床意义。方法(1)用免疫组织化学法(IHC)和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测40例胰腺癌患者组织标本和血清中Dc R3蛋白的表达,分析其与临床病理因素之间的相关性。(2)用流式细胞仪(FCM)检测上述40例胰腺癌患者外周血中CD4+、CD8+T细胞的表达,探讨Dc R3对胰腺癌患者机体免疫功能的影响。结果(1)Dc R3在胰腺癌组织中阳性率为62.5%,在相应非癌胰腺组织中阳性率为12.5%。Dc R3在胰腺癌组织中的阳性率明显高于非癌胰腺组织,两者的差异有统计学意义(χ2=21.33,P<0.001),而且Dc R3的表达与肿瘤分期及淋巴结转移密切相关,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)胰腺癌患者血清中Dc R3的表达水平明显升高,与胰腺良性肿瘤组和正常健康组相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。(3)胰腺癌患者外周血中CD4+/CD8+比值与Dc R3表达水平呈负相关关系(Spearman,r=-0.6512,P<0.0001)。结论Dc R3蛋白在胰腺癌中的高表达与肿瘤分期及淋巴结转移呈正相关。血清中Dc R3的表达与胰腺癌患者外周血中CD4+/CD8+呈负相关,是影响机体免疫功能的因素之一。第二部分在胰腺癌细胞中靶向沉默Dc R3对T淋巴细胞功能的影响目的观察在胰腺癌Panc-1细胞中靶向沉默Dc R3的表达对T淋巴细胞功能的影响。方法构建针对Dc R3基因的小干扰RNA慢病毒包装体系转染人胰腺癌Panc-1细胞,转染后与淋巴细胞混合培养,采用流式细胞术检测T细胞活化,T细胞亚群的变化以及Th1细胞、Th2细胞的偏移,ELISA检测IFN-γ和IL-4水平。流式细胞术通过CD3-/Annexin V-FITC/PI检测混合培养细胞中肿瘤细胞的凋亡率,并用利用CFDA-SE检测分析混合培养细胞中T淋巴细胞增殖率。结果(1)转染Dc R3-si RNA48h后的Panc-1细胞中Dc R3蛋白表达下降。(2)转染细胞与T淋巴细胞混合培养后CD3+、CD4+T细胞增多(P<0.05),而CD8+T细胞无明显变化,而且Th1细胞增多,Th2细胞细胞减少(P<0.05),细胞上清液中代表Th1型细胞因子的IFN-γ浓度升高(P<0.01)而代表Th2型细胞因子的IL-4水平下降(P<0.01)。(3)发现Dc R3-RNAi组T细胞上CD25、CD69的表达升高、T淋巴细胞的增殖率上升,而且Dc R3-RNAi组肿瘤细胞的凋亡率也有明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在胰腺癌细胞中靶向沉默Dc R3的表达,可以有效恢复T淋巴细胞的免疫调节功能,纠正失衡的Th1/Th2细胞因子网络。Dc R3有望成为胰腺癌基因治疗和免疫调控的潜在靶点。