油茶软腐病内生拮抗细菌的分离筛选及菌剂的研制

来源 :中南林业科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:JK0803_zhoukaijun
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油茶软腐病是油茶产区主要的危险性病害,在我国南方各省均有不同程度危害,油茶软腐病现已成为安徽省补充检疫对象。该病主要危害油茶叶片和果实,受害部位腐烂,并造成大量落叶和落果,甚至叶、果落光,造成重大的经济损失。在苗圃中,油茶枝叶受害相当严重,甚至整株枯死。目前,对油茶软腐病的防治主要以化学防治为主,尚无生物防治报道。本论文从油茶健康叶片中筛选软腐病菌内生拮抗细菌,并对其进行鉴定,最后制成干粉剂和可湿性粉剂两种剂型,并用于田间防治。主要内容结果汇报如下:(1)油茶软腐病内生拮抗细菌的筛选和鉴定。从湖南省攸县采集的油茶健康叶片中分离到内生细菌56株,通过平板对峙试验和液体发酵试验,从中筛选出一株对油茶软腐病病菌有拮抗作用的内生细菌,编号为L46。结合其菌落形态,生理生化及16S rDNA序列分析,确定L46是解淀粉芽孢杆菌。油茶软腐病拮抗菌株L46保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏号为CCTCC M 2010324。该拮抗菌对油茶软腐病菌的菌丝有致畸作用,引起菌丝的破碎、断裂。(2)油茶软腐病内生拮抗细菌L46发酵条件的优化。采用单因素实验和正交优化实验,单因子试验表明:菌株L46的最佳培养基为NB培养基,最佳碳源是乳糖,最佳氮源是蛋白胨和酵母膏;在温度30℃,初始pH7.0,摇瓶装液量为50mL,接种量7%,摇床转速140 r/min,发酵周期72h的条件下可获得最大抑菌活性。葡萄糖、蛋白胨、酵母浸膏、NaCl四因素的正交试验表明:菌株L46获得最大抑菌活性的培养基配方为乳糖2.0%,蛋白胨0.8%,酵母膏1.1%,NaCl 0.5%.在最优培养基和培养条件下,测定拮抗菌L46的生长曲线和抑菌时程曲线,结果表明,拮抗菌L46在培养36h后,生物量达到最大值,但此时抑菌活性并非最高,在培养72h后,拮抗菌L46才获得最高的抑菌活性。(3)油茶软腐病内生拮抗细菌L46菌剂的研制。通过单因子试验,筛选到适合做拮抗菌L46可湿性粉剂的助剂,即载体为高岭土,STPP为分散剂,SDBS为润湿剂,硫酸锌为芽孢萌发促进剂,另选用抗坏血酸为紫外线保护剂。以润湿性和悬浮率为指标,对高岭土、硫酸锌、STPP、SDBS进行正交试验分析,最终确定拮抗内生菌L46可湿性粉剂的配方及比例,即高岭土35.72%,硫酸锌1.34%,STPP3.57%,SDBS 8.93%,抗坏血酸0.44%,L46原粉50%。对生防菌L46可湿性粉剂的各项指标进行检测,均已达到国内标准。通过对该粉剂的保存温度和保存时间研究,初步确定该粉剂可在常温下存放,保存时间至少为两个月至半年,但具体的有效期限还需进一步验证。在三个不同的实验基地对该生防菌剂进行了田间防效实验,结果显示该生防菌剂对油茶软腐病其田间防效效果显著,与化学试剂防效相当。
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