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目的:通过观察养心汤中臣药川芎不同浓度的含药血清对过氧化氢(H2O2)诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型细胞活性的影响,探讨可能的作用机制,进一步研究养心汤防治不稳定型心绞痛的作用机制,为研发防治UA的新药奠定基础。 方法:采用含药血清制备的方法,将20只Wistar大鼠随机分为2组,分别为川芎组和空白组,川芎组给予川芎水煎剂灌胃,空白组给予等剂量生理盐水,每日灌胃给药2次,连续给药1周,于末次给药后1h心脏取血,分离血清,配制含药血清培养液。采用体外细胞培养的方法,将冻存HUVEC复苏、培养、并且传代。待细胞状态稳定时左右,将细胞消化、收集、计数,以每孔2×104cells接种于96孔培养板,分为5组,分为H2O2模型组,空白血清组,川芎含药血清2%组,川芎含药血清4%组,川芎含药血清6%组,每组6个附孔。川芎含药血清各组用不同浓度的川芎含药血清干预24h,空白血清组和H2O2模型组用空白血清培养液培养24小时。再用浓度100μmol/L的H2O2干预人脐静脉内皮细胞2h(除空白血清组除外),复制氧化损伤的细胞模型。采用倒置荧光数字成像显微镜下观察细胞形态变化,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力。 结果:1、形态学变化:空白血清组细胞生长良好,排列成单层铺路石样。H2O2损伤模型组细胞损伤明显,而川芎含药血清各组细胞受损情况均有明显改善,且浓度越高,细胞损伤程度越轻。 2、MTT结果显示:H2O2模型组细胞OD值明显降低,与空白血清组相比差异具有有统计学意义(p<0.01)。2%,4%,6%川芎含药血清各组细胞的OD值均比H2O2模型组明显升高,差异具有统计学意义(p<0.01)。其组间比较也具有统计学意义(p<0.01),且存在浓度依赖性。 2%,4%,6%川芎含药血清各组细胞的增殖率均明显升高,与H2O2模型组相比差异有统计学意义(p<0.01)。其组间比较也具有统计学意义(p<0.01),且存在成浓度依赖性。 结论:养心汤中臣药川芎含药血清通过其抗氧化的作用改善H2O2损伤内皮细胞的形态学变化,促进其损伤的内皮细胞增殖,提高细胞的活性,从而达到保护作用,这可能是养心汤防治不稳定心绞痛作用机制之一。