漆酶（Laccase，苯二醇：氧氧化还原酶，EC l．10．3．2）是一种含铜的多酚氧化酶。其作用底物非常广泛，能氧化大量的酚类或非酚类物质。漆酶在造纸制浆、环境保护、能源领域、生物传感器和生物检测、食品工业和有机合成等方面具有非常高的潜在应用价值。漆酶的这些应用价值引起了越来越多的研究人员的兴趣。但现阶段漆酶主要来源于真菌的发酵，产量比较低，而且酶的活性也普遍不高，这些都限制了其大规模工业化应用。通过对漆酶基因进行改造，并异源高效表达是解决这一问题的途径之一。在灰盖鬼伞中有17个非等位漆酶基因已经被克隆并测序，不过到目前为止只有几个漆酶被纯化和功能分析。本研究根据灰盖鬼伞漆酶LCC1的蛋白序列（GenBank:AAS38574.1）和毕赤酵母密码偏爱设计了新的漆酶基因CCLCC1I，基因阅读框长度为1578bp，全长基因通过PTDS方法化学合成。采用毕赤酵母表达系统对该基因进行高效表达，并研究重组漆酶的酶学特性和在降解染料方面的能力。首先根据LCC1蛋白序列和毕赤酵母密码偏爱设计新的漆酶基因的核苷酸序列，再根据此序列设计一系列引物，用以合成目的基因。合成好的基因经大肠杆菌克隆并测序，结果显示基因序列与设计的完全一致。新的漆酶基因通过序列对比发现与原基因之间的核苷酸序列存在79.2%的同源性。将测序正确的漆酶基因CCLCC1I连接到pPIC9K表达载体上，通过电转法导入毕赤酵母细胞中，通过筛选获得高酶活的重组酵母菌株。该重组菌在发酵4天后蛋白表达量达到最高，为890mg/L，远高于在A. oryzae中异源表达的8.0^-135mg/L。经过硫酸铵分级沉淀和Ni亲和层析分离纯化出单一的重组蛋白，SDS-PAGE电泳结果表明，其分子大小约为60kDa，含糖量约为8%。酶学特性研究表明，重组漆酶的Km和Vmax值分别为0.136mM和9,778μM min^-1mg^-1。重组漆酶的最适pH值为3.4，但在中性或碱性环境下更加稳定，在pH值小于3.4时重组漆酶的稳定性极差，在4℃保存24小时后，酶活仅剩6%，pH值为4.2时，剩余酶活迅速提高到74.1%。重组漆酶的最适温度为40-45℃，在35-50℃之间，酶活性都非常高，超过50℃后，酶活随温度升高逐渐降低。重组漆酶的热稳定性比较好，在低于50℃时，非常稳定；60℃温育60分钟后还剩余45.6%的酶活；当温度超过70℃后，重组漆酶的稳定性急剧下降，温育仅15℃后就只剩35.3%的酶活。Cu²⁺对重组漆酶没有促进作用，在10mM时反而抑制重组漆酶的活性。重组漆酶对Al³⁺，Fe³⁺，Fe²⁺，NaF和NaN3比较敏感，在10mM浓度下，Al³⁺，Fe³⁺和NaF处理后漆酶的残余活性仅剩27.1%，1.2%和33.9%。NaN3对重组漆酶的抑制效果极其明显，在1mM浓度下就能抑制其98.3%的活性，非常适宜作为漆酶反应实验的终止剂。Fe²⁺对重组漆酶的影响比较特殊，主要表现在，低浓度（0.1mM）下促进重组漆酶的活性，高浓度（0.2mM）下抑制其酶活，在0.3mM时，漆酶活性仅剩4.5%。对重组漆酶降解染料能力的研究发现，漆酶不能直接降解结晶紫和孔雀石绿，但在ABTS的参与下，其降解能力大大提高。在含有0.05mM的ABTS时，37℃处理60分钟，CV和MG的降解率分别达到77.7%和79.2%。随着ABTS浓度的增加，其降解速率会越快。通过本实验研究表明，经过改造的漆酶基因能在毕赤酵母中高效表达，而且重组漆酶CCLCC1I的表达量非常高，在中性和碱性环境稳定性高，该漆酶的热稳定性也比较优秀，而且也具有较好的降解染料的能力，为漆酶的高效表达和处理工业废水等应用奠定了酶学基础。