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本文以海金沙为研究对象,分别对总黄酮和酚类化合物的提取、分离、纯化进行研究,并对其挥发性成分作色谱分析,初步的建立GC指纹图谱,为开发利用海金沙资源提供理论依据。其主要研究内容如下:
(1)海金沙中总黄酮的提取。采用了超声提取方法,考查提取时间、溶剂、料液比、温度等因素对总黄酮提取率的影响。结果表明:最佳提取工艺条件为:以70%乙醇溶液为溶剂,在料液比1:10(m/V),70℃温度下提取90 min,总黄酮提取率可达2.2%。
(2)海金沙中总黄酮的分析。比较了AlCl3法和NaNO2-Al(NO3)3-NaOH法测定海金沙中总黄酮的差异。通过加标回收实验测定分析的准确度,并进行方法学考察,分析了精密度实验及稳定性实验的相对标准误差。结果表明:NaNO2-Al(NO3)3-NaOH法测定海金沙中总黄酮含量更为稳定和准确。用NaNO2-Al(NO3)3–NaOH显色,放置15min,在最大吸收波长510nm处测定总黄酮含量。浓度在0~0.05mg·mL-1之间有良好的线性关系,回归方程为 C=0.0939A,R2=0.9998。加标回收率在98.8%~100.2%之间。
(3)海金沙中总黄酮的分离纯化。采用大孔树脂吸附和液液萃取对总黄酮进行分离纯化。通过正交试验及单因素实验优化工艺条件。结果得出最佳工艺条件为:在固液比为1:6(m/V),吸附时间为90min,吸附温度为50℃,解吸剂浓度为70%乙醇下,总黄酮的提取率为1.8%。在静态吸附实验基础上进行了动态吸附分离实验,总黄酮纯度达到87.1%。
(4)海金沙中多酚类化合物提取及分离。通过单因素实验及正交试验,确定最佳超声提取工艺条件为:在乙醇浓度70%,料液比为1:10(m/V),超声提取时间为60 min,提取温度为70℃下,海金沙中多酚提取率可达16.5%。同时,通过对大孔树脂静态吸附及解吸,得出最佳工艺条件是:固液比为1:8(m/V),pH为6,吸附时间为150min,吸附温度为30℃,解吸剂浓度为90%,多酚提取率为20.9%。在静态吸附实验基础上进行了动态吸附实验,在吸附流速为0.5BV/h,用90%乙醇洗脱,洗脱速度2 BV/h,总酚纯度达到76.0%。
(5)初步建立海金沙全草的GC指纹图谱分析方法。采用毛细管气相色谱法测定了10个批次的海金沙样品。在优化色谱条件下,确定了海金沙药材的GC指纹图谱由14个特征峰构成,不同产地海金沙的GC指纹图谱有一定差异。其主要成分由GC/MS确认。