鹅细小病毒病(Goose Parvovirusis,GP)是由鹅细小病毒(Goose Parvovirus,GPV)引起雏鹅的急性、亚急性和败血性传染病,俗称为小鹅瘟,呈世界性分布,发病率和死亡率极高,给养鹅业带来了巨大经济损失。目前,国内外对GP的防治主要采取弱毒疫苗免疫母鹅的方式,而使雏鹅获得免疫,虽然在该疫病的预防方面发挥着重要作用,但弱毒疫苗存在着散毒和毒力反强的现象,使其应用受到了限制。因此,急需研制一种安全、有效的新型疫苗。重组痘病毒疫苗以其安全、稳定和能够表达外源基因的优点受到广大研究者的关注,特别是重组禽痘病毒(Fowlpoxvirus,FPV),含有复制非必需区,可以插入外源基因构建多价联苗,并能持续表达外源抗原,刺激机体持续产生特异抗体,而得到广泛应用。GPV基因组主要编码三种结构蛋白,分别是VP1,VP2,VP3,其中VP3是病毒的主要衣壳蛋白,能刺激机体产生中和抗体。γ干扰素(IFNγ)通过提高细胞免疫水平来增强机体的抗病毒能力,大量研究表明其具有良好的免疫佐剂作用。因此,本研究为构建共表达GPV-VP3基因和鹅INFγ基因的重组禽痘病毒,以先前构建的pMD-18T-GPV-IFNγ质粒为模版,用带EcoR I 酶切位点的引物进行PCR扩增,得到的目的基因进行TA克隆,连接到pSY538载体启动子下游,构建pSY538-γ-LacZ,用NotI切取目的基因和报告基因并插入到转移载体pSY681 中,获得 pSY681-LP2EP2-IFNγ-LaacZ 基因,最后通过 Clon Express Ⅱ One Step Cloning Kit 将 LP2EP2-VP3-LacZ 基因克隆到 pSY681-LP2EP2-IFNγ的Not I酶切位点完成GPV-VP3基因和鹅IFNγ基因转移载体的构建(pSY-GoIFNγ-VP3),采用脂质体法将其转染至禽痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF),经蓝斑法筛选重组病毒,并进行8轮蚀斑纯化,以及PCR鉴定和间接免疫荧光(IFA)分析。结果表明,所获得的重组病毒rFPV-GoIFNγ-VP3能稳定表达外源基因。本研究为进一步开展rFPV-GoIFNγ-VP3重组禽痘病毒疫苗的体内试验奠定了基础,同时也为其它禽类传染病的重组禽痘病毒疫苗研制提供了借鉴。