论文部分内容阅读
目的：慢性阻塞性肺部疾病(chronic obstructive pulmonary diseases, COPD),是一种不完全可逆的气流受限特征的可预可治的疾病。吸烟是慢性阻塞性肺部疾病(COPD)的主要致病因素之一。香烟含有大量的氧化物质,如醛类、尼古丁等,可以导致肺上皮细胞氧化损伤,释放一系列炎症因子,进而产生肺功能障碍。格隆溴铵(Glycopyrronium Bromide, Gly)是一种被证实了的毒蕈碱受体拮抗剂,具有很强的支气管扩张作用。本实验以香烟烟雾(CS)暴露的小鼠和香烟提取物(CSE)刺激的肺上皮细胞(A549)为模型,研究Gly对香烟烟雾引起的小鼠中提状态下肺部炎症的抑制作用,并通过细胞模型探讨Gly抑制肺部炎症作用的信号分子机制。方法：整体实验,采用ICR小鼠,将小鼠随机分为空白组,模型组；模型组分格隆溴铵低、中、高剂量组(150,300,600μg/ml)与噻托溴铵阳性对照组(Tio,300μg/ml)及地塞米松阳性对照组(Dex,1mg/kg),分别给药干预,每天气雾给药5min,1h后进行连续四天香烟暴露,每天的烟量为7,7,9,11支,第五天处死小鼠,计数肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数、中性粒细胞数、巨噬细胞数和淋巴细胞数；过氧化物髓化酶(MPO)活力和谷胱甘肽(GSH)水平；以及ELISA检测BALF中炎症细胞因子：白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素8(IL-8)、转化生长因子β(TGF-β),取左上肺制备组织匀浆,用Real-time PCR方法测定肺组织匀浆中炎症因子的表达；左下肺制作组织切片,分别进行免疫组化和HE染色检测。离体实验,用香烟提取物CSE刺激肺上皮细胞A549细胞,诱导上皮细胞炎症因子表达和蛋白释放增加；采用Gly预处理,研究Gly在CSE诱导的炎症反应中的调节作用并探讨其作用的可能信号通路。结果：(1)Gly可减轻吸烟诱导的肺部炎症：在整体实验中,气雾给予不同剂量的Gly均能有效地减少由香烟引起的BALF中白细胞、中性粒细胞和巨噬细胞数增多,下调肺组织中炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-8、TGF-β的高表达,与模型组比较差异有显著性(p<0.001,0.01),且呈现明显的量效关系：香烟暴露小鼠体内的GSH水平明显下降,MPO活性明显上升；Gly使GSH水平升高,并使MPO活性下降与模型组比较差异有显著性(p<0.01)；肺组织免疫组化结果表明,小鼠香烟暴露之后,MMP-9高表达而TIMP-1表达下降,Gly可逆转这两种蛋白的表达,与模型组比较差异有显著性(p<0.01)。(2)离体实验中,CSE刺激A549细胞24h能够引起TGF-β1和MMP-9表达升高,TIMP-1下降。而Gly能抑制这些炎症因子表达,同时升高细胞内GSH水平,抑制JNK/NF-κB信号通路,但是对ERK1/2和p38信号通路无抑制作用。同整体!结论：格隆溴铵能有效减轻吸烟引起的小鼠肺部炎症。体外试验显示,格隆溴铵可能通过JNK/NF-κB信号通路抑制CSE诱导的炎症反应。