一株猪传染性胃肠炎病毒的分离鉴定及其对仔猪致病性研究

来源 :黑龙江八一农垦大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tonghuasong00000
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猪传染性胃肠炎(Transmissible gastroenteritis,TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)引起猪以腹泻、呕吐、脱水为主要特征的一种高度接触性肠道传染病,可感染各个年龄段猪尤其对哺乳仔猪具有高度致死率,传播方式主要是粪-口途径,对养猪业造成很大危害。因此,分离TGEV可为该病的流行病学、生物学特征以及作为疫苗生产的后备毒株筛选奠定物质基础。本研究利用TGEV阳性猪粪便及小肠内容物在PK-15细胞中进行病毒分离,成功分离一株TGEV。该分离毒在盲传10代时出现细胞病变,通过对第15代分离毒进行巢式RT-PCR,间接免疫荧光试验,电镜观察的方法成功鉴定。测定病毒TCID50为10-5.25/0.1 mL。为了深入探究该毒株对仔猪的致病性,本试验对第15代分离毒经口服的方式感染未吃母乳的3日龄仔猪进行致病性分析。结果表明,攻毒组仔猪在感染12 h后陆续出现腹泻症状;而对照组仔猪未见异常。临床症状评分表明攻毒组仔猪在攻毒36 h与阴性对照组相比差异极显著。84 h将仔猪安乐死,剖检可见,攻毒组仔猪肠壁变薄,肠内有粥状物。荧光定量PCR结果表明,攻毒组仔猪肛门拭子及肠道均能检测出病毒核酸;肠道病理切片结果显示攻毒组仔猪的空肠、回肠绒毛萎缩或脱落现象,肠黏膜上皮细胞发生变性、坏死,肠黏膜下层有大量炎性细胞浸润;免疫组化观察可见攻毒组空肠、回肠肠黏膜上皮细胞内出现明显阳性信号,对照组无明显变化。本研究成功分离鉴定一株TGEV并对其在仔猪体内进行致病性试验,结果表明,该分离株对仔猪有致病性。本研究为未来TGEV致病机制研究、疫苗株筛选及检测方法建立提供前期基础。
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