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目的:通过构建体外人牙周膜成纤维细胞(Human periodontal ligament fibroblasts)静压力加载模型,探索静压力对p38MAPK磷酸蛋白和IL-17 A、IL-17R和IL-6表达的影响,并观察p38 MAPK特异性抑制剂SB203580预处理后,静压力对炎性因子表达的变化,为正畸力下牙周膜成纤维细胞生物力学的信号转导以及与炎症因子的关系提供新思路和实验基础。方法:1、收集健康前磨牙的根中1/3牙周膜,利用组织块培养法行原代培养。采用细胞免疫荧光对培养的细胞进行来源鉴定。采用CCK8法检测0-5g/cm2静压力和不同浓度的抑制剂SB203580刺激HPDLF后增殖活性的变化,从而构建体外HPDLF的静压力加载模型。2、采用Western blot(WB)法检测0-5g/cm2静压力对HPDLF内p38磷酸蛋白表达情况。3、ELISA和RT-PCR检测静压力对白介素17受体(IL-17R)、白介素17(IL-17A)、和白介素6(IL-6)蛋白和mRNA表达变化。经p38MAPK抑制剂SB203580预处理HPDLF后,检测IL-17A、IL-17R和IL-6的mRNA和蛋白表达。实验结果:1、经组织块原代培养5天后可以得到长条形的成纤维细胞。传至第四代的成纤维细胞以漩涡方式生长,此时生长状态良好。细胞免疫荧光鉴定结果显示细胞来源于中胚层,结合取材部位可鉴定为HPDLF。体外1-4 g/cm2的静压力值可以促进HPDLF生长,在2 g/cm2组细胞增殖能力最强,3-4 g/cm2组时细胞增殖变缓,并有少量下降。5g/cm2的力值作用下细胞受到明显抑制作用。体外低于8μmol/L浓度的SB2023580对细胞增殖有一定促进作用,其中在2μmol/L时增殖能力最强。而当浓度增大至16μmol/L后,细胞增殖则受到抑制。2、经WB检测发现,在0-1g/cm2组,HPDLF内p38磷酸蛋白表达无明显变化。当力值增加至2-5g/cm2时,HPDLF内p38磷酸蛋白表达增加,且随加力时间呈动态变化,其中10min时表达开始增加,刺激30min时磷酸蛋白表达量最高,至60min后磷酸蛋白表达下降。3、RT-PCR和ELISA结果发现,静压力刺激HPDLF能上调IL-6和IL-17R的mRNA及IL-6、IL-17R和IL-17A蛋白的表达。当抑制剂SB203580预处理HPDLF后,4g/cm2静压力刺激下IL-6的mRNA和蛋白表达受到抑制作用。SB203580对HPDLF表达IL-17A和IL-17R无明显抑制作用。结论:1、组织块原代细胞培养法能成功构建人牙周膜成纤维细胞系,传至第四代的细胞增殖活性增强,且生物学性状稳定。2、适宜的静压力和浓度的SB203580能促进HPDLF增殖,而过大的静压力和浓度的SB203580会抑制细胞的增殖,其中2g/cm2为HPDLF最适静压力,2μmol/L为最适浓度。3、p38 MAPK是静压力在HPDLF内转导信号分子,当静压力力值达到2g/cm2能激活HPDLF内p38 MAPK信号通路,静压力对HPDLF内p38MAPK活性呈动态变化。4、静压力能促进HPDLF对IL-17A、IL-17R和IL-6因子的表达。p38MAPK可能是静压力诱导HPDLF分泌IL-6的一条信号通路。但静压力对体外HPDLF调控IL-17可能并不是通过p38MAPK信号转导完成。