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目的：探讨地黄多糖对骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化过程中脑区相关基因和骨形态发生蛋白4(BMP4)表达的影响,从MSCs跨胚层分化角度阐述中医”肾生髓,通于脑”的理论。方法1.采用体外贴壁培养法筛选分离小鼠MSCs,于不同时间首次换液,用细胞计数和免疫细胞化学法检测MSCs的纯度和生长特性。2.传3代后的细胞分为完全培养基组、地黄多糖组、BMP4组和地黄多糖合BMP4组,培养24小时后,完全培养基组、地黄多糖组用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测MSCs分化细胞的BMP4 mRNA表达水平。同时用免疫细胞化学法检测四组的MSCs分化细胞的NF200和GFAP表达。3.传3代后的细胞分为完全培养基组、地黄多糖组和地黄多糖合BMP4组。培养24小时后,用RT-PCR半定量分析三组中脑区相关基因Emx2 mRNA, Otx2 mRNA和Hoxbl mRNA的表达。结果1.24h首次换液组,细胞生长较缓慢,对数生长期晚,CD44阳性表达率最高,为(88.11±1.67)%,CD45阳性表达率最低,为(26.37±2.60)%；3d首次换液组,细胞增殖速度快,对数生长期早；5d首次换液组,前5d生长速度较快,6d后生长渐缓慢,CD44阳性表达率为(79.63±1.53)%,CD45阳性表达率最高,为(36.55±1.22)%。三组间比较CD44、CD45阳性表达率均有极显著性差异(P＜0.01)。2.在完全培养基组有较低水平的BMP4 mRNA表达,为(0.25±0.3),而地黄多糖能促进BMP4 mRNA的表达,为(0.58±0.7)。两者相比有极显著性差异(P＜0.01)。3.完全培养基组仅有少量NF200和GFAP阳性细胞分化,分别为(8.47±1.65)%和(5.97±1.48)%,与地黄多糖组、BMP4组和地黄多糖合BMP4组相比均有极显著性差异(P＜0.01)。地黄多糖、BMP4、地黄多糖合BMP4均能促进上述NF200和GFAP阳性细胞的分化水平,其阳性表达率分别为(63.43±4.68)%和(14.05±2.88)%、(48.93±5.23)%和(16.55±1.96)%、(77.25±3.27)%和(23.36±2.96)%,均以NF200为主。在NF200、GFAP阳性表达率两方面,地黄多糖联合BMP4组与地黄多糖组和BMP4组相比都有极显著差异(P＜0.01)。而地黄多糖组NF200阳性表达率较BMP4组增多(P＜0.01),GFAP表达率较BMP4组少(P＜0.05)。4.完全培养基组有较低水平的Emx2 mRNA、Otx2 mRNA、Hoxb1 mRNA的表达,分别为(0.49±0.028)、(0.28±0.045)和(0.077±0.016),地黄多糖、地黄多糖合BMP4能促进上述表达.分别为(0.77±0.045)、(0.50±0.043)、(0.311±0.0 49)和(0.83±0.042)、(0.62±0.047)、(0.405±0.0 35)。与完全培养基组比较,地黄多糖组和地黄多糖合BMP4组表达增高显著(P＜0.01)；其中地黄多糖合BMP4组表达最高,与地黄多糖组比Emx2mRNA、Otx2mRNA表达显著增多(P<0.01), Hoxb1 mRNA的表达也较多(P＜0.05)。结论1.不同时间首次换液对贴壁法MSCs的生长有影响,单从细胞纯度来考虑,24h首次换液较为理想,从细胞生长情况和纯度综合考虑,3d首次换液较为理想。2.BMP4能促进MSCs向神经细胞分化,地黄多糖通过影响BMP4诱导MSCs向神经细胞分化。3. MSCs向神经分化过程中有脑区相关基因Emx2 mRNA,Otx2 mRNA和Hoxbl mRNA的表达,地黄多糖能增强这些基因的表达。4.从MSCs跨胚层分化角度阐述了中医“肾生髓,通于脑”的理论,进一步丰富了中医脏象学说。