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目的:研究多器官功能障碍综合征(MODS)脾脏树突状细胞(DC)在MODS病程中功能活性和免疫耐受性的变化,证实MODS晚期脾脏耐受性DC的形成及其对免疫器官损伤与机体免疫抑制的影响,阐明耐受性DC诱导机体免疫耐受的机制和作用通路,并探讨PD-L1抗体对机体免疫耐受状态的改善作用。方法:采用酵母多糖腹腔注射致MODS模型,320只C57BL/6小鼠随机分为三个实验组:正常对照组、MODS组和PD-L1抗体干预组,又进一步分为6h,12h,24h,48h,5d和12d组6个时相组。各组实验动物分别留取血清和组织,并应用MiniMACS免疫磁珠分离脾脏DC和T细胞用于体外细胞学实验。运用流式细胞术、免疫组化/免疫荧光与RT-PCR方法检测DC对CD11c,MHC-II、CD86、PD-L1、PD-1与PIR-B等的表达及T细胞对多种表面标志物的表达,采用ELISA方法检测血清、脾组织及细胞培养液中IL-12p70、IL-12p40、IL-10、TNF-α、IL-1β、HMGB-1及IL-2等细胞因子的水平变化,运用混合淋巴细胞反应实验检测DC对T细胞的免疫激活作用和MTT法检测T细胞增殖功能,应用TUNEL及流式细胞术检测脾脏免疫细胞凋亡,光镜观察各组脾脏的病理形态学改变。结果:脾脏DC在MODS早期和急性损伤期对MHC-II、CD86等成熟标记分子表达增高,在缓解期和晚期MHC-II、CD86表达明显下降;脾脏DC对PD-L1的表达在MODS急性损伤期较正常对照组短暂升高,在晚期持续显著升高;在正常对照组脾脏DC对PD-1无表达,而在MODS病程各期均见表达,自早期至晚期PD-1含量逐渐升高;耐受性分子PIR-B在DC中表达自缓解期开始明显升高并持续至晚期;MODS早期分泌因子IL-12p70增加,IL-12p40及IL-10量少,晚期脾脏DC表达IL-10、IL-12p40增加而IL-12p70降低。MODS晚期,脾脏CD4~+T细胞在MODS急性损伤期仅表达少量PD-1,而在MODS晚期CD4~+T对PD-1表达量明显升高;MODS晚期CD4~+CD25~+foxp3~+Treg数量明显增加,且与PD-L1~+DC表达密切相关;脾脏T细胞增殖能力减弱,分泌IL-2减少,T细胞免疫功能抑制;MODS晚期DC混合淋巴细胞培养中抑制T细胞增殖的功能,PD-L1抗体能降低DC对T细胞增殖的抑制。HMGB-1在急性损伤期以后持续升高,晚期达峰值;MODS晚期脾白髓萎缩,淋巴细胞明显减少,呈现大量凋亡现象; PD-L1抗体干预组,T细胞增殖功能增强及IL-2分泌增加,Treg含量减少,脾脏白髓面积恢复至正常组水平。结论:1、检测了MODS病程中脾脏树突状细胞免疫表型表达,发现脾脏DC自MODS缓解期对MHCⅡ类分子和共刺激分子(CD86)表达就开始减少,晚期达到低谷;而对共抑制分子(PD-L1)和耐受性分子(PIR-B)的表达在缓解期升高并持续至晚期。MODS晚期DC含量虽仍较多,但其功能状态已从病程早期的过度活化变成了晚期的活性低下,而且还演变成为耐受性DC。提示在MODS晚期耐受性DC占据了主导地位,是机体免疫抑制的主要免疫细胞学因素。2、MODS晚期脾脏树突状细胞高表达PD-L1发生免疫耐受变化的同时,脾组织中IL-12p40和IL-10等含量明显升高,CD4~+T细胞高表达PD-1,脾脏T细胞数量减少,增殖减弱,Treg含量增加及细胞凋亡增多。表明耐受性DC可以通过启动PD-L1/PD-1通路分泌免疫抑制因子、诱导T细胞失能,在MODS晚期发挥负向免疫调节作用,引起机体免疫抑制和多器官衰竭。3、首次运用流式细胞术与免疫荧光方法检测并发现MODS病程中树突状细胞存在PD-1的表达,伴随MODS晚期DC活性降低和耐受性形成,DC对PD-1的表达明显升高。而正常小鼠无PD-1表达。推测DC表面PD-1受体的出现和含量变化,可能与诱导DC免疫耐受及PD-L1/PD-1通路形成有关。4、应用PD-L1抗体阻断PD-L1/PD-1通路,可以使树突状细胞分泌IL-12p40减少而IL-12p70增加,促进T细胞增殖及分泌IL-2数量增加。提示阻断PD-L1/PD-1通路的方式可以作为改善MODS晚期免疫功能的一个治疗靶点。