目的：本课题研究的目的是在正常人脑cDNA文库中通过酵母双杂交技术筛选与人DND1相互作用的蛋白质,并对筛选出的蛋白质进行相关功能初步分析,为进一步研究人DND1的功能及信号通路奠定基础。方法：(1)以人dnd1cDNA为模板用PCR的方法扩增人dndl目的基因,目的片段和重组质粒行双酶切,连接,转化大肠杆菌,构建人DND1蛋白的酵母双杂交诱饵质粒pDBleu-dnd1,测序比对结果匹配后检验其毒性和自激活性,同时扩增正常人脑cDNA文库,为下一步进行DND1蛋白的相互作用蛋白筛选及相互作用网络的构建奠定基础；(2)在正常人脑cDNA文库中,利用酵母双杂交技术筛选与人DND1相互作用的蛋白,得到的阳性克隆质粒行双酶切及测序鉴定；(3)用共转化法将诱饵质粒pDBleu-dnd1和阳性克隆质粒回转入酵母菌AH109中进一步验证；(4)回转验证阳性克隆质粒提取后行测序及同源性分析。结果：(1)构建了穿梭质粒pDBleu-dnd1,并通过检测证实构建的重组质粒对酵母菌无毒性,无自激活性；(2)应用酵母双杂交技术以及生物信息学分析,我们在正常人脑组织的cDNA文库中筛选出四个与人DND1有相互作用的蛋白质,分别为GRN, FLAD1, EFEMP1, RNF31。通过酵母双杂交回转验证及NCBI数据库中blast分析,排除酵母蛋白干扰、实验结果假阴性、假阳性,比对DNA序列100%匹配。结论：(1)成功构建用于酵母双杂交技术筛选的诱饵质粒pDBLeu-Dndl;(2)利用酵母双杂交技术我们成功的筛选出了与人DND1蛋白相互作用的四个蛋白质,分别为(GRN, FLAD1, EFEMP1, RNF31)。