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目的:肝纤维化（HF）是各项慢性肝病共同的基本病理特征,持续的肝纤维化会逐步发展为肝硬化甚至肝癌,因此寻找有效的抗肝纤维化药物亟待解决。课题组前期发现两头尖（RAR）具有抗炎、抗肝癌的作用,醋炙效果更佳,提示两头尖可用于肝病,因此本文研究就两头尖的醋炙工艺、醋制前后化学成分和毒性变化、抗肝纤维化的潜在靶点及通路、体内外药效及作用机制进行研究。方法:1.采用单因素考察、交叉实验设计确定两头尖醋炙的闷润时间、米醋用量、炒制温度、炒制时间等参数。2.UHPLC-Q-Orbitrap/MS联用技术检测两头尖及醋两头尖化学成分。对ICR小鼠存活情况、体重增长及摄食量、脏器组织病理学改变、肝肾功能指标水平进行测定,探究不同剂量两头尖及醋两头尖急性毒性。3.SD大鼠灌胃给药,取血清样本,UHPLC-Q-Orbitrap/MS检测两头尖入血成分,Swiss Target Prediction和TCMSP数据库获取入血成分靶点,Genecards及OMIM数据库获取肝纤维化靶点,Cytoscape 3.8.1软件构建两头尖入血成分—靶点—肝纤维化作用网络,STRING数据库构建PPI网络,GO富集分析和KEGG富集分析筛选两头尖抗肝纤维化潜在靶点和通路。4.构建CCl4诱导的SD大鼠肝纤维化模型,秋水仙碱为阳性药,给予不同浓度的两头尖和醋两头尖。ELISA法测定大鼠血清中TNF-α、IL-1β等血清细胞因子和HA、LN等肝纤维化指标,生化试剂盒测定MDA、SOD等抗氧化指标,生化分析法测定AST、ALT等肝功能指标,取大鼠肝脏观察外观状态,HE和Masson染色法检测大鼠肝纤维化程度,免疫组化检测大鼠肝组织TGF-β1、α-SMA的表达,RT-q PCR技术检测大鼠肝纤维化相关m RNA的表达,Western-blot法检测大鼠肝组织中TGF-β1、α-SMA等肝纤维化相关蛋白的表达。5.以TGF-β1诱导的HSC-T6细胞作为体外肝纤维化模型,CCK-8法测定HSC-T6细胞增殖情况,流式细胞术检测对HSC-T6细胞周期的影响,Hoechst染色法和JC-1染色法检测HSC-T6细胞凋亡和线粒体膜电位变化,RT-q PCR技术检测HSC-T6细胞肝纤维化相关m RNA的表达,Western-blot法检测HSC-T6细胞TGF-β1、α-SMA等肝纤维化蛋白的表达。结果:1.两头尖的醋炙工艺为:每100g净两头尖,加20g米醋,拌匀,闷润2h,120℃炒制15min,取出,晾凉。2.从两头尖和醋两头尖中共指认32个化合物,其中负离子模式29个,正离子模式3个,差异化合物22个,其中负离子模式20个,正离子模式2个,Raddeanoside R3等化合物含量降低,Oleanolic acid等化合物含量升高。随着给药浓度的降低,两头尖及醋两头尖毒性反应变小,空白组小鼠体重增长迅速,摄食饮水正常,高浓度给药组出现死亡、嗜睡、腹泻等毒性反应,所有小鼠脏器均无实质损伤,两头尖最大无毒性反应剂量31.30g/kg,约为成人给药剂量69倍,醋两头尖为47.99g/kg,约为成人剂量106倍。3.从两头尖水煎液中鉴定26个化合物,多为三萜皂苷类,其中19个为原型入血成分,基于Swiss Target Prediction和TCMSP数据库获取了18个入血成分的作用靶点,通过Genecards和OMIM数据库获得6897个肝纤维化靶点,共发现369个不重复靶点作用于肝纤维化,与肝纤维化关系密切的靶点包括Akt1、STAT、MAPK3等,靶点蛋白主要作用于蛋白酪氨酸激酶活性、酰胺结合等方面,主要作用通路可能为磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶（PI3K-Akt）信号通路、钙信号、癌症蛋白多糖信号通路等。4.两头尖及醋两头尖能减轻CCl4诱导的肝组织病理损伤,逆转CCl4所致的脾、肝指数升高,降低血清中AST、ALT、ALP、TBIL、DBIL、TBA、GGT水平,降低MDA含量,提高SOD活性,降低血清细胞因子TNF-α、IL-1β水平,升高IL-10水平,降低PC-III、LN、Col-IV、HA等肝纤维化指标,降低Col-1、α-SMA、TGF-β、Smad-2、Smad3等肝纤维化相关基因的m RNA和蛋白表达,增强Smad7 m RNA和蛋白表达,抑制PI3K-Akt-mTOR信号通路蛋白的的磷酸化。5.两头尖、醋两头尖水提物、竹节香附素A（RDA）、齐墩果酸（OA）均能抑制HSC-T6细胞增殖,使HSC-T6细胞周期阻滞于G0/G1期,诱导HSC-T6细胞凋亡,降低细胞中TGF-β1、α-SMA、Col-1a1、Smad2、Smad3的m RNA和蛋白表达,增强Smad7 m RNA和蛋白表达,抑制PI3K-Akt-mTOR信号通路蛋白的的磷酸化。结论:（1）两头尖醋炙前后化学成分发生改变,毒性降低。（2）两头尖及醋两头尖对CCl4诱导的肝纤维化有明显的治疗作用,其作用可能是与调控TGF-β1/Smad信号通路和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。