红枣环磷酸腺苷、芦丁集成提取和环磷酸腺苷的纯化研究

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本试验以红枣为原料,研究环磷酸腺苷的提取工艺;选用试剂沉淀、离子交换树脂处理、膜过滤、制备色谱精制工艺来分离环磷酸腺苷;对枣渣中芦丁进行提取研究,达到枣资源的综合利用的目的,试验结果如下:1.建立了新郑灰枣中环磷酸腺苷高效液相色谱测定方法。色谱条件:色谱柱为艾杰尔Venusil Mp—C18柱(150×4.6 mm),流动相采用体积比为20:80的甲醇与0.05M磷酸二氢钾混合液,流速为1.0ml/min, PDA—100双通道紫外检测器,柱温35℃,进样量为20ul。2.采用微波超声联合提取方法,确定最佳提取工艺参数为:料液比0.07g/ml,微波功率450W,微波时间为97s,超声时间28min,超声温度60℃,在此条件下,试验得到新郑灰枣环磷酸腺苷的提取率为103.15ug/g。在所测定的不同产地的九种大枣中,内黄扁核酸中的cAMP含量最高为421.22ug/g, cAMP含量最低的是山东金丝小枣为95.57ug/g。3.试验拟定乙醇去除多糖果胶类大分子物质,将提取液浓缩至10mg/ml,4倍乙醇沉淀,放置层析6小时,离心过滤后,用苯酚硫酸法测定沉淀前后多糖的吸光度,计算多糖的去除率,得到多糖的去除率70%。4.试验选用201×4树脂初步分离环磷酸腺苷,得出参数条件为:上样液浓度为40ug/ml,pH=5.0,上样速率V=1.0ml/min,洗脱速率为V=1.0ml/min,先用水洗脱,后用1M甲酸洗脱,8min/管收集甲酸洗脱液,合并5管-14管中环磷酸腺苷含量高的管数,得到环磷酸腺苷的HPLC纯度为:36.25%,回收率为83.81%。测得脱色率为91.35%,多糖去除率为94.62%。5.将201×4柱后液过超滤纳滤装置,通过分子量进一步分离环磷酸腺苷,得到环磷酸腺苷的HPLC纯度为:68.42%。6.采用waters制备系统精制初步纯化过的环磷酸腺苷,得到纯度90%以上的环磷酸腺苷,表明C18制备柱适合分离环磷酸腺苷。7.将提取过环磷酸腺苷的枣渣提取芦丁,充分的利用资源。试验确定芦丁提取条件后对其进行响应面优化试验,得到参数条件为:乙醇浓度为70%,料液比1:40,浸提时间为9h,浸提温度为71.00℃,在此条件下,枣渣中芦丁的提取率为154.66mg/100g。
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