PC12细胞系克隆于大鼠嗜铬细胞瘤，它在神经生长因子（NGF）的诱导下，能够向神经元细胞方向分化，并具有神经元细胞的很多生理特征，因此PC12细胞作为一种模型细胞被广泛使用。本论文目的是建立能够稳定表达GFP-Actin融合蛋白的PC12细胞系，并在此基础上初步探究外界物理刺激和脂质体对细胞骨架的影响。Actin蛋白作为细胞骨架的基本组成单位，在细胞骨架的建立、重构以及细胞迁移等正常生理活动中有重要作用，对Actin蛋白进行荧光标记就可以对PC12细胞骨架进行实时观察，而绿色荧光蛋白（GFP）能够在很多不同的细胞中稳定表达，其发出的荧光稳定，不易淬灭，在细胞中表达对细胞没有毒性，被广泛的用于细胞内荧光观察。因此，建立能够稳定表达GFP-Actin融合蛋白的细胞系就能够实现对PC12细胞骨架的实时观察。　　 本研究使用脂质体转染技术将含有pAcGFP1-Actin基因序列的真核表达质粒载体导入PC12细胞内，同时使用阳离子聚合物为载体介导转染，以比较两种介导材料的效率高低。通过G418筛选，建立稳定表达pAcGFP1-Actin融合蛋白的PC12细胞系。在这个基础上，初步探究生物相容性材料脂质体对PC12细胞的微丝性骨架的影响以及AFM针尖对PC12细胞骨架局部刺激后细胞骨架的变化。本论文的主要研究工作分为三部分：　　 首先，利用脂质体和阳离子聚合物介导的基因转染技术将含有pAcGFP1-Actin基因序列的真核表达质粒导入正常的PC12细胞，并比较两种载体的转染效率。使用G418筛选，建立稳定表达pAcGFP1-Actin蛋白的PC12细胞系。　　 其次，用乙醇注入法制备脂质体，用不同浓度的脂质体溶液与PCl2细胞共培养，观察细胞在脂质体存在的条件下细胞骨架的变化，从而评估脂质体对PC12细胞骨架的影响。　　 最后，利用原子力显微镜的针尖对PC12细胞表面进行局部物理刺激，用荧光倒置显微镜实时观察细胞骨架的修复情况。　　 使用阳离子聚合物和脂质体介导的转染方法，都成功的构建了稳定表达pAcGFP1-Actin蛋白的PC12细胞系。在本实验室条件下，阳离子聚合物的转染效率要略高于脂质体的转染效率。用乙醇注入法制备的脂质体对PC12细胞存在一定的毒性，在较高浓度脂质体存在的条件下，12小时后，细胞骨架趋向于解聚，细胞形态显现典型的毒性反应。但是低浓度的脂质体对细胞骨架的影响并不明显。使用AFM针尖对PC12细胞表面局部进行物理刺激后，细胞骨架有微小创伤，局部荧光消失。在刺激后35分钟内，细胞骨架荧光恢复。