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脑胶质瘤是最常见的原发性颅内肿瘤，占成人颅内肿瘤的35.26～60.96％，其中恶性胶质瘤达60％，预后差，病死率高。尽管目前临床采用的综合治疗手段(包括显微手术、高剂量的放疗和化疗)不断有所改进，但疗效仍不理想，随着肿瘤生物学和分子遗传学的进展，人们逐渐认识到：和人体其他部位的肿瘤一样，胶质瘤发生发展主要是原癌基因的激活与抑癌基因的失活并由此产生一系列基因异常和动态演进的结果，其中原癌基因EGFR的激活和抑癌基因p53的突变失活与胶质瘤的发生、发展及其对诊断、治疗和预后的关系尤其受到关注。 目前，来自欧美学者的研究认为，EGFR扩增、突变与过表达和p53失活可能代表形成恶性胶质瘤的两种不同的分子途径。低恶度星型细胞瘤进展到间变性星型细胞瘤乃至继发胶质母细胞瘤其早期主要的分子事件是p53突变，而原发胶质母细胞瘤中的早期主要分子事件是EGFR扩增和／或过表达，甚有认为这两个基因变化在原发和继发胶质母细胞瘤中是相互排斥的。根据这些基因变化特点将胶质母细胞瘤区分为原发和继发胶质母细胞瘤已经成为分子生物学应用于临床病理的例证并被广泛接受。但我们既往曾分别对EGFR及p53胶质瘤的表达及突变进行研究，发现国人低恶度星型细胞瘤中的p53基因突变率仅达5.3％，远低于国外报告的30％-40％；而原发胶质母细胞瘤中p53基因突变达45.5％，又明显高于国外报告的10％；EGFR过表达在原发胶质母细胞瘤中达72％，但在低恶度星型细胞瘤中也高达33.3％。这种分子病理学差异是源于种族的不同抑或其他原因尚不清楚，因此进一步研究这种差异是开发和研制针对性治性措施的基础。 鉴于EGFR及p53基因表达的组织特异性，有关人脑胶质瘤的EGFR与p53基因表达水平及其变化规律，已经有一些学者进行了探讨，但是两者共表达尤其是p53突变与EGFR表达的关系，以及两者与肿瘤病理类型、增殖活性、生物学行为等方面的研究，国内则未见报道，国外仅见个别报道。而两者在不同肿瘤病理级别类型尤其是在不同胶质母细胞瘤类型中的表达情况及相互关系对肿瘤的病理分类及病情发生、发展及预后有重要的影响。为了进一步阐明人脑胶质瘤中EGFR与p53基因表达规律及两者相互关系，本课题对50例不同恶性程度的胶质瘤及2个体外恶性胶质瘤细胞系，6例正常脑组织，采用分子生物学技术通过Southern杂交、RT一PCR、PCR一SSCP及DNA测序等方法对EGFR及p53的基因异常表达同时进行检测，分析它们的变化和内在联系及与肿瘤病理类型、恶性程度和增殖活性等生物学性状的关系，并对星细胞起源的胶质瘤进行了单独的分析，为胶质瘤基因治疗优选目的基因提供实验依据。并通过体内、体外试验探讨反义EGFR基因和野生型p53基因作为联合基因治疗胶质瘤优选靶的之一的可行性;为最终联合基因治疗胶质瘤提供实验依据。第一部分人脑胶质瘤表皮生长因子受体和P53蛋白基因表达与细胞增殖活性的相关性研究 对50例不同恶性程度的胶质瘤、2个体外恶性胶质瘤细胞系、6例正常脑组织采用免疫组化技术检测EGFR及p53蛋白表达;采用S。uthern杂交、RT一PCR，检测EGFR基因扩增情况及mRNA表达;采用PCR一SSCP及DNA测序方法确定p53基因突变及其位点，并研究EGFR及p53基因共表达及两者的相互关系。一、人脑胶质瘤表皮生长因子受体的基因扩增与过表达 RT一PCR及免疫组化检测发现EGFRmRNA及蛋白表达水平均随胶质瘤恶性程度的增加而增加。在6例正常脑组织中均无EGFRmRNA表达(F检验，P<0 .01)。胶质瘤体外细胞系、WH0m、W级与正常脑组织、I一11级间均有显著差异(P<0.01);而、WHOm级与W级之间均无明显差异(P> .05)。6例正常脑组织EGFR也无明显表达;EGFR在胶质瘤中的表达阳性率和表达水平也随肿瘤恶性程度增加而增加(x‘=24.024，0.01<p<0.05);各级别相互间比较结果111、IV级高于I、11级(xZ=18.260，p<0.01)，EGFR蛋白表达水平与病理分级呈正相关(r=0.542，p(0.001)，111级与IV级和细胞系EGFR表达水平没有有显著性差异(xZ=4 .350，p>0.5)。胶质瘤111、IV级组和恶性胶质瘤体外细胞系中EGFR扩增率高于正常脑组织和胶质瘤I一11级组。胶质瘤111、IV和恶性胶质瘤体外细胞系中EGFR DNA含量无显著差别。(F检验，F=6 .2，P<。.01，各组间比较q检验，P<0.01)。 我们的结果显示，EGFR过表达率为64%( 32/50)，而扩增率为26%(13/50)。在IV级、111级、I一11级胶质瘤中，EGFR过表达分别为，90.90%，61.00%，50.00%，而扩增分别为36.36%，34.78%，8.33%，W级EGFR过表达中10例有4例有扩增，Hl级EGFR过表达中14例有8例有扩增，I一11级EGFR过表达中8例有1例有扩增。在W级中，原发胶质母细胞瘤中EGFR过表达可达83.33%(5/6)，而扩增为33.3%(2/6)。比较EGFR过表达与扩增的相互关系，二者并不一致。有EGFR扩增的13例中均有过表达，但其余19例EGFR过表达无扩增。显示EGFR扩增均有过表达，但过表达的部分标本并无扩增，EGFR的RT一PCR检测也证实了该结果。本组资料显示，在111、IV级的胶质瘤中EGFR蛋白过表达发生频率及表达强度均高于n级的胶质瘤，但正常脑组织并未检察到EGFR蛋?