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目的通过建立新生大鼠短暂缺氧模型,模拟新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic ischemic encephalopathy,HIE)的临床病理过程。采用腹腔注射法给予促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)治疗,通过检测大鼠的白质损伤情况及认知功能变化,研究促红细胞生成素对缺氧缺血大鼠的神经保护作用;通过检测海马组织血管密度及VEGF/VEGFR2通路相关蛋白的表达情况,探究促红细胞生成素发挥神经保护作用的可能机制。方法1.参照Nyakas的方法,将新生7日龄雄性SD大鼠置于100%氮气中持续缺氧10min,建立新生大鼠HIE模型。通过观察比较对照组和缺氧模型组大鼠的一般神经行为学表现;尼氏染色法观察海马组织神经元损伤情况,以及缺氧后48h、72h脑组织含水量;判断缺氧模型组大鼠的脑组织损伤情况,评价模型建立情况。2.按照实验设计,将新生7日龄雄性SD大鼠随机分为5组:control,anoxia+vehicle,anoxia+rh EPO,anoxia+SU5416+rh EPO,anoxia+SU5416;通过评价各组大鼠的一般生长发育情况(包括睁眼时间、门齿显露时间、竖耳时间及体重变化),LFB染色法检测胼胝体中部的白质损伤情况,免疫荧光(Lectin染色)检测海马组织血管密度,Morris水迷宫实验检测各组大鼠的认知功能,以及Western blot技术检测各组大鼠海马组织EPOR、VEGF、t-Raf1、p-Raf1、t-ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达情况,综合分析rh EPO腹腔应用对HIE大鼠的治疗作用,同时探究血管再生相关通路VEGF/VEGFR2在其中发挥的作用。结果1.缺氧模型组大鼠在缺氧过程中出现躁动、紫绀、窒息、昏迷等脑组织缺氧及神经功能障碍的表现;与对照组相比,缺氧模型组大鼠的脑组织含水量增加,海马CA1区神经元变性严重,学习、记忆能力及空间定向能力减退;2.各组大鼠的一般生长发育状况(睁眼时间、竖耳时间、门齿显露时间)及早期体重变化(40日龄之前)没有明显的差异,40日龄之后,缺氧组大鼠的体重较对照组明显降低;3.LFB染色结果显示,缺氧各组大鼠均存在一定程度的白质损伤,其中anoxia+rh EPO组白质损伤情况较其他3个缺氧处理组大鼠明显减轻;免疫荧光染色结果表明,anoxia+rh EPO组大鼠海马CA1区血管密度较其他缺氧组明显增加;Morris水迷宫结果显示,与对照组相比,缺氧各组大鼠均存在一定的认知功能障碍,而rh EPO腹腔应用能明显改善缺氧大鼠的认知功能;4.Western blot结果显示,缺氧处理后,大鼠的EPOR及VEGF表达量增加,rh EPO腹腔应用后,增加幅度更明显;t-Raf1及t-ERK1/2表达量不受缺氧及rh EPO治疗的影响,但是p-Raf1及p-ERK1/2表达量在缺氧及rh EPO治疗后明显增加;与anoxia+rh EPO组相比,anoxia+SU5416+rh EPO组大鼠的p-Raf1及p-ERK1/2表达量明显降低。结论本研究通过100%氮气环境中缺氧的方法,成功建立了新生大鼠HIE模型;大剂量rh EPO(5000U/Kg)腹腔注射给药,能够减轻缺氧造成的脑损伤,发挥神经保护作用,明显减轻白质损伤,改善认知功能障碍,促进血管再生;rh EPO的神经保护作用可能与其激活VEGF/VEGFR2通路有关。