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研究背景高血压作为一种综合症,广泛参与对机体的损害过程。因此,减少甚至消除高血压对靶器官的损害有十分重要的临床意义。业已证实,高血压的发生发展严重影响了心脏结构和功能的改变,这种改变同样发生在心脏组织和细胞层面上。内质网应激(ERS)是一种细胞层面上的反应,它是由于某种原因导致细胞内质网内稳态失衡,并引起生理功能发生紊乱的一种亚细胞器上的病理过程。大量的研究表明,ERS在冠心病、糖尿病等多种疾病的发生过程中起重要作用。但在高血压的形成过程中是否发生ERS,ERS对高血压心脏损害有何作用,目前尚不十分的明确。血管紧张素II(AngII)是促使心肌细胞凋亡的重要诱因之一,AngII与血管紧张素II 1型受体(AT1受体)结合可引起心肌细胞凋亡。研究表明:以卡托普利(Cartopril)为代表的大多数血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)均可有效降低高血压心肌细胞凋亡。但是ACEI类药物(卡托普利)降低高血压心肌细胞凋亡是否有ERS的参与,目前仍不十分清楚。研究目的本研究通过建立高血压大鼠模型,观察ERS重要相关因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)在高血压大鼠心肌上的表达及其心肌细胞凋亡,探讨高血压与ERS的关系及其作用机制,初步探讨应用血管转化酶抑制剂保护高血压心肌细胞凋亡的ERS分子机制,旨在寻找高血压与ERS的内在联系,为最终防治高血压对心脏的损害提供新的理论依据和治疗新靶点。研究方法本研究通过腹主动脉缩窄术(TAC)建立大鼠高血压模型,采用颈动脉插管法测定血压值,用蛋白免疫印迹法(Western blot)和免疫组化法检测心肌组织GRP78蛋白和CHOP蛋白的表达水平,用TUNNEL法检测心肌细胞凋亡。动态观察:(1)高血压形成过程中3d、7d、14d和28d心肌组织GRP78和CHOP蛋白表达的变化;(2)高血压形成过程中3d、7d、14d和28d心肌细胞凋亡的变化;(3)卡托普利对心肌组织GRP78和CHOP蛋白表达的影响;(4)卡托普利对心肌细胞凋亡的影响。研究结果(1) TAC3d组、TAC7d组、TAC14d组和TAC28d组的平均动脉压均高于相应Sham组(P<0.05);且TAC各组平均动脉压随着术后时间的延长,血压值呈逐渐递增趋势。(2) GRP78蛋白在TAC术后3d即发现表达(0.20±0.02),且高于Sham3d组(0.10±0.02),并有统计学意义(P<0.05),但低于其他各TAC组(P<0.05)。随着术后时间的延长,TAC7d组GRP78蛋白表达达到最高(0.94±0.03),其后各组呈递减趋势;但TAC7d组、TAC14d组和TAC28d组GRP78蛋白表达的水平均明显高于相应Sham组(P<0.05)。(3)随着大鼠TAC术后时间的延长,心肌组织中CHOP蛋白表达呈递増趋势;TAC7d组、TAC14d组和TAC28d组CHOP蛋白表达的水平分别为0.17±0.01、0.36±0.03、0.61±0.02,均明显高于相应Sham组(P<0.05)。TAC3d组CHOP蛋白表达与其Sham组比较,无明显差异(P>0.05)。(4) Sham3d组和TAC3d组中仅见微量凋亡细胞;Sham7d组和TAC7d组即可见较多凋亡细胞,且随着时间的延长细胞凋亡率逐渐增加,TAC28d组凋亡率达最高(30.23±0.17%);TAC7d组、TAC14d组和TAC28d组细胞凋亡率分别较其Sham组増高,差异有统计学意义(P<0.05)。(5)相关性分析显示,从TAC术后7d起各观察点的平均动脉压与心肌组织中GRP78蛋白表达呈显著负相关(r=-0.999,P=0.034),与CHOP蛋白表达呈显著正相关(r=0.996,P=0.004);CHOP蛋白表达与GRP78蛋白表达呈显著负相关(r=-0.979,P=0.042),与心肌细胞凋亡率呈显著正相关(r=0.998,P=0.001)。(6) Cartopril组平均动脉压为124.67±6.26mmHg,显著低于TAC组(169.73±6.58),但高于Sham组(117.08±7.92),差异有统计学意义(P<0.05);TAC组平均动脉压高于Sham组,差异有统计学意义(P<0.05)。(7) GRP78在Cartopril组的平均光密度值为0.20±0.02,显著低于TAC组(0.35±0.03),但略高于Sham组(0.16±0.03),差异有统计学意义(P<0.05);TAC组GRP78蛋白表达的平均高密度值高于Sham组,差异有统计学意义(P<0.05)。(8) CHOP在Cartopril组表达的平均光密度值为0.23±0.03,显著低于TAC组(0.46±0.05),但高于Sham组(0.07±0.02),差异有统计学意义(P<0.05);TAC组CHOP蛋白表达的平均光密度值高于Sham组,差异有统计学意义(P<0.05)。(9) Cartopril组可见少量凋亡心肌细胞(18.73±0.28%),显著低于TAC组(31.67±0.54%),但略高于Sham组(13.49±0.12%),差异有统计学意义(P<0.05);TAC组细胞凋亡率显著高于Sham组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究结论(1) ERS参与了高血压形成过过程。(2)高血压诱导心肌组织ERS在血压升高早期以GRP78蛋白表达占优势,呈保护性反应。(3)随着血压持续性升高导致CHOP在心肌中超表达,ERS参与心肌细胞凋亡这一病理过程,并使心肌内质网应激稳态调节发生失衡。(4) ACEI类药物能够通过降低心肌组织ERS水平,减少高血压心肌细胞凋亡,从而对心肌细胞起保护作用,作用机制可能与其抑制ERS凋亡信号分子CHOP的表达有关。综上所述,不难看出高血压诱导了心肌组织ERS;在血压升高早期,高血压通过诱导以GRP78为代表的内质网稳态调节因子的表达,ERS以稳态调节为主;血压的不断升高诱导CHOP为代表的凋亡因子在心肌中超表达,ERS以凋亡反应为主。高血压大鼠ERS引起GRP78及CHOP表达稳态失衡可能参与介导了高血压心肌重构这一病理过程。高血压持续时间的长短和血压值的高低,一定程度上决定了心肌组织内质网应激稳态调节和凋亡反应的程度;以卡托普利为代表的ACEI类药物能够通过降低心肌组织ERS水平,减少高血压心肌细胞凋亡,从而对心肌细胞起保护作用。但是,ERS在高血压形成过程中介导心肌稳态调节和凋亡反应的具体转折点和卡托普利降低ERS水平的分子作用机制仍有待进一步研究。