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目的:胃癌是一种严重威胁人类健康的恶性肿瘤,胃癌转移被认为是胃癌难以治愈的主要原因。胃癌转移方式有多种,淋巴道转移是其中一种主要方式。淋巴管内皮细胞的增殖、迁移和管腔形成构成了肿瘤淋巴道转移的重要环节即肿瘤诱导的淋巴管新生。靶向胃癌诱导的淋巴管新生促进淋巴道的转移在扼制胃癌发展方面有着至关重要的作用。在肿瘤转移中,肿瘤微环境中的肿瘤细胞与淋巴管内皮细胞之间的相互作用影响着淋巴管的生成以及肿瘤细胞的侵袭转移。肿瘤沿淋巴道转移细胞分子机制和相关药物研制已成为新的研究热点。褐藻多糖硫酸酯(fucoidan)是一种含有丰富硫酸基团的,具有多种生物学活性的海洋褐藻类多糖。研究发现,fucoidan在抗肿瘤方面有着良好的效果,并且与传统的化疗药物相比较,因其产自天然所以毒副作用较小。血管内皮生长因子C(VEGF-C)及其受体血管内皮细胞生长因子受体3(VEGFR-3)是促进淋巴管新生的重要因素。基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)参与降解细胞外基质进而导致肿瘤的侵袭转移。PI3K/Akt/NF-κB信号通路是一条与细胞增殖、迁移和侵袭密切相关的信号通路,能够促进肿瘤的发生发展。趋化因子1(CXCL1)是一种能够促进肿瘤侵袭和进一步提高恶性肿瘤转移的趋化因子。方法:1.采用MTT法检测fucoidan对SGC7901细胞活力的影响,同时通过流式细胞术(Flow cytometry)检测fucoidan对SGC7901细胞周期的影响。2.采用Transwell小室法检测fucoidan对SGC7901细胞迁移和侵袭能力的影响。3.采用ELISA法检测fucoidan对SGC7901细胞分泌的MMP-2,MMP-9,TIMP-1和VEGF-C的影响,采用RT-PCR法检测fucoidan对SGC7901细胞VEGF-CmRNA水平的影响。4.Western blot检测fucoidan对SGC7901细胞中信号通路NF-κB/PI3K/Akt的影响。5.采用共培养方法检测fucoidan对SGC7901细胞对HLEC细胞管样结构形成能力的影响,采用Western blot检测共培养体系下,fucoidan对HLEC细胞中VEGFR-3和p-AKT蛋白水平的影响。6.Transwell小室法检测CXCL1对SGC7901细胞侵袭能力的影响,ELISA法检测fucoidan作用下CXCL1对SGC7901细胞MMP-2的分泌的影响,免疫荧光法检测fucoidan对裸鼠体内CXCL1的表达水平的影响。7.SGC7901胃腺癌细胞建立裸鼠肿瘤模型,免疫荧光双标记法检测fucoidan对裸鼠胃腺癌生长以及淋巴管密度(LVD)的影响。结果:1.MTT实验结果表明fucoidan抑制SGC7901细胞活力。流式细胞术结果显示,fucoidan通过阻滞G0/G1期使细胞无法转向S期而产生抑制作用。2.Transwell实验结果显示fucoidan抑制SGC7901细胞迁移侵袭能力。3.ELISA实验结果表明fucoidan抑制SGC7901细胞MMP-2,MMP-9,TIMP-1和VEGF-C的分泌。RT-PCR结果显示在mRNA水平,fucoidan抑制vegf-c的表达。4.Western blot法检测结果表明fucoidan能够下调PI3K,Akt磷酸化水平的表达以及NF-κB蛋白表达从而影响PI3K/Akt/NF-кB信号通路的表达。5.共培养条件下,成管实验结果显示fucoidan能够抑制SGC7901细胞与HLEC细胞共培养下HLEC细胞的成管能力。Western blot结果显示fucoidan下调HLEC中VEGFR-3和p-AKT表达。6.Transwell和ELISA实验结果表明fucoidan抑制CXCL1对SGC7901细胞侵袭的促进作用,免疫荧光实验显示fucoidan抑制裸鼠肿瘤中CXCL1的表达。7.动物实验结果显示fucoidan在肿瘤生长和肿瘤诱导的淋巴管新生方面具有抑制作用。结论:Fucoidan抑制SGC7901细胞增殖,迁移,侵袭以及SGC7901细胞诱导的淋巴管新生可能与抑制VEGF-C分泌,下调VEGFR-3的表达以及钝化PI3K/Akt/NF-кB信号通路有关。