流感是一种由流感病毒引发的传染病,患者以发热、粘膜充血、急性呼吸道症状为主。该病发病率高,破坏性强,从二十世纪三十年代人类发明流感疫苗至今,每年仍有25～50万人死于流感。季节性流感以H1、H3亚型为主,而禽流感H5、H7亚型也不断出现人类感染病例。流感病毒不断变异,随时都有可能进化成为大流行流感毒株,世界上很多国家都在研发新型流感疫苗以应对多种亚型流感大流行。本研究利用生物信息学方法、免疫学知识,对H1、H3亚型流感病毒的T、B细胞表位进行预测与筛选,获得CTL表位3条:H1HA545-553、H3HA546-554、H3NP189-197,B和Th细胞表位4条:H1HA142~156、H1HA212~226、H3HA247~261、H3HA287~301。结合已发表的表位,设计、合成CTL、B/Th多表位表达盒。以H5HA、H7HA、H1NP、多表位表达盒为主要目的基因,pVAX1为载体构建用来预防H5、H7、H1、H3亚型流感的多表位核酸疫苗。将所构建的疫苗载体转染BHK细胞,通过RT-PCR和IFA验证核酸疫苗抗原成分可以在真核细胞中成功表达。利用小鼠作为哺乳动物模型,对所构建的复合多表位核酸疫苗免疫原性进行研究,表明构建的核酸疫苗在诱导细胞免疫及体液免疫方面具有显著优势。本实验的创新之处在于:1)依靠H5、H7亚型流感主要抗原成分,结合H1、H3抗原的功能表位构建了一种新型复合多表位核酸疫苗,目的是通过疫苗接种来预防H5、H7、H1、H3多种亚型流感病毒;2)预测多条H1、H3亚型流感功能表位,并将表位设计成能够发挥功能的多表位表达盒;3)通过小鼠实验免疫评价构建核酸疫苗的免疫原性。