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研究背景和目的 肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤，占全部恶性肿瘤的16％，恶性肿瘤死亡的28％，5年生存率只有13％。2000年仅美国死于肺癌者有161，900，占癌症死亡的29％。上海、北京、东北和沿海几个较大城市的肺癌死亡率也很高。而且近几年来，肺癌的发病率仍在增加，发病年龄在年轻化。肺癌严重地威胁着人民的健康和生命。 在肺癌的研究和临床实践中，一级预防固然重要，而二级预防——早期诊治仍是关键所在。随着分子生物学和免疫学的发展，肿瘤标记物在肺癌的诊治中正受到越来越大的关注，为探索特异的有效的肿瘤标记物，国内外已开展了大量的实验研究，尤其对于角蛋白家族。目前研究最多的是K19片段抗原21—1(cyfra 21—1)，其在鳞癌的诊断、分期、疗效检测和预后方面起着越来越重要的作用。但是cyfra 21—1由于在正常表皮也能表达，总是不可避免的存在着假阳性的可能。浙江大学硕士学位论文角蛋白家族中另一成员K16(keratin 16)一直以来被认为是增殖的标志，在皮肤病领域的扁平苔醉和银屑病中表达较高，而在肿瘤领域研究甚少。而浙江大学肿瘤研究所丁佳逸教授在基因芯片筛查中发现K16在肺癌组织中表达较高，在肺癌组织的浓度是癌旁正常组织浓度的13.8倍，比K19(6倍)更高。为了进一步揭示K16与肺癌的关系，本实验应用荧光定量PCR(fluorescencequantitative一PCR，FQ一PCR)的方法检测纤支镜活检肺癌组织和良性病变组织K16mRNA水平的表达，从而确定K16 mRNA在肺癌组织和良性病变组织中表达水平有无差异，探讨其能否成为一种新的肿瘤标记物。对象和方法于2003年11月一2004年2月在浙江大学附属邵逸夫医院收集到纤支镜活检标本场例。其中肺癌组26例，包括鳞癌17例，腺癌7例，小细胞肺癌2例，肺良性病变组10例，包括结核7例，炎症3例。应用荧光定量PCR技术进行K16mRNA的表达的检测，得到相应的Ct值。FQ一PCR定量分析根据目的片段K16Ct值/内参照GAPDH Ct值=K16精确定量。结果普通PCR检测结构:肺癌组织和良性病变组织的K16经过35个PCR循环均有扩增条带，但颜色均较浅，而空白对照则无明显条带。说明K16在两者中均有较低的表达。FQ一PCR检测结果:取K16Ct值/GAPDHCt值为其K16 mRNA的精确含量，浙江大学硕士学位论文26例肺癌活检组织中K16 mRNA表达的最小值为0.82，最大值为1.19(1.05士0.07)，而肺良性病变活检组织中K16mRNA表达最小值为1.01，最大值为1.21(l .08士0.06)。经SPSSfo:windows 10.0独立样本t检验，本实验中肺癌活检组织和肺良性病变活检组织中K16表达差异无明显统计学意义(t=1.187，P=0.243)。另外，肺癌组中把鳞癌独立成组，即分为肺鳞癌组(17例)、其他肺癌组(9例)和良性病变组(10例)。鳞癌组中K16 mRNA表达最小值为0.82，最大值为1.12平均值为1.03士0.07，但是经独立样本t检验，鳞癌和肺良性病变组的差异亦无统计学意义(t=1.68，P=0.106)。而其他肺癌组最小值0.99，最大值1.19，平均值为1 .81士0.05，与良性病变组极为接近。经独立样本t检验，鳞癌组和其他肺癌组的差异也无统计学意义(t月.812，P=0.082)。结论K16mRNA在肺癌组织和肺良性病变组织均有较低的表达。2.肺癌组织和肺良性病变组织中K16mRNA的表达水平不存在显著的差异。