虫道真菌（ambrosia fungi）是一类与食菌小蠹形成长期互利共生的真菌。食菌小蠹（ambrosia beetle）通过贮菌器（mycangium）携带虫道真菌,将虫道真菌作为重要的食物来源,而虫道真菌则借助食菌小蠹的飞行能力进行扩散传播。被虫道真菌侵染后,树木树势衰弱或死亡,木材或板材失去经济价值。由于虫道真菌传播方式隐蔽、菌株分离和鉴定难度大,口岸检出率低增加了其潜在传播风险。随着我国口岸进境原木数量的不断增加,食菌小蠹传播扩散虫道真菌所带来的潜在风险越来越受到重视,但目前与之相关的检测资料缺乏、我国研究较少。基于此,本论文针对上海口岸虫道真菌随进境原木传入风险高、口岸检出率低等问题,开展了进境原木虫道真菌的分离方法与鉴定技术的研究,主要研究结果如下:1.通过“动植物检验检疫信息资源共享服务平台”的截获信息,对我国2007-2017年间口岸进境原木中携菌类钻蛀性有害昆虫进行统计,确定高风险进境食菌小蠹类群主要为小蠹和长小蠹,并围绕数据分析的结果,展开相关的培养方法及鉴定技术研究。2.根据截获数据的分析情况,对口岸进境原木有针对性的采样。通过2018年3月-2019年3月对上海外高桥、洋山和吴淞等口岸进行进境原木样本采集和监测工作,收集到来自4个大洲14个不同国家和地区的23种原木样本及原木上6种食菌小蠹虫体有效样本合计194份。3.针对截获的高频进境原木上的小蠹和长小蠹,根据虫道真菌生长特点、食菌小蠹的生物学及结构特征、不同原木寄主特性等,应用5种真菌分离方法即:稀释分离法（Dilution plating）、直接分离法（真菌）[Direct plating（fungi）]、直接分离法（昆虫体表）[Direct plating（insect）]、划线分离法（Streak plate）和直接分离法（植物组织）[Direct plating（plant tissue）],从疑似样本采集、培养基选择和制备、虫道真菌的分离及菌种保存等方面,确立常见属种的有效分离培养方法。通过分离和筛查工作,得到28个属398株真菌,筛查出其中34株真菌属于已知虫道真菌。4.采用核糖体DNA大亚基片段（Large subunit ribosomal DNA,LSU r DNA）通用引物,对木材真菌进行初步鉴定,筛选出木材真菌28属,其中3属为虫道真菌属。通过对34株虫道真菌采用形态学观察及描述、多基因（ITS、LSU、SSU和TUB2）鉴定技术,系统发育关系的研究进行鉴定。经鉴定,主要虫道真菌种类及数量为Raffaelea属（8种）、Leptographium属（1种）和Ceratocystiopsis属（1种）,其中9种真菌在我国国内尚未有分布。本论文的研究,首次在口岸进境原木中确立了食菌小蠹虫道真菌的筛查、培养及鉴定方法,为提高虫道真菌的口岸检出率奠定了技术基础,提高了口岸检疫人员对食菌小蠹类携带的虫道真菌高风险扩散传播的认知水平。