壬基酚致红鲫鱼胚胎发育畸形的转录组分析及功能基因挖掘

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壬基酚(nonylphenol,NP)是广泛存在于水体中的环境激素,能对生物体的生长发育造成影响。为了探究壬基酚对水生生物发育的影响及其机制,本研究以红鲫鱼(Carassius auratus red var.)为研究对象,观察红鲫鱼胚胎在NP胁迫下发生的形态学变化。对正常神经胚期胚胎(NCK)、正常21体节期胚胎(SCK)和暴露5μmol/LNP中发育畸形的神经胚期胚胎(NNP)、畸形21体节期胚胎(SNP)进行转录组测序。利用同源克隆及RACE技术获得影响胚胎发育候选基因的cDNA序列;使用qRT-PCR进行候选基因的表达分析,并进行候选基因甲基化检测分析。结果发现在NP胁迫下红鲫鱼胚胎出现脊柱弯曲及血栓等畸形现象。RNA-seq共得到89 166条高质量unigenes,NCK、SCK、NNP和SNP两两比较的差异表达基因共13554个。利用qRT-PCR验证了25个差异表达基因,说明了转录组测序结果可靠。挑选出候选基因Sox8和GATA1,Sox8基因cDNA序列长度为2 163 bp,编码391个氨基酸;GATA1基因的cDNA序列长度为2 730 bp,编码443个氨基酸。qRT-PCR分析结果显示:Sox8在红鲫鱼脑中表达量最高,在肝脏和垂体中表达量极低;GATA1在精巢中表达量最高,在肝脏和卵巢中表达量极低。NP对红鲫鱼胚胎中Sox8基因的表达量影响最大的时期是咽囊期,GATA1基因的表达量影响最大的时期是体节期,3μmol/L NP处理对红鲫鱼胚胎中Sox8和GATA1基因的表达量影响最大。甲基化分析结果发现,对照组中GATA1 mRNA表达与GATA1基因5’ UTR区甲基化程度显著正相关;NP处理组GATA1基因的甲基化程度高于对照组。
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